分泌抗氨苄青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本试验用将氨苄青霉素（AMPI）半抗原和载体蛋白BSA、HAS、KLH用戊二醛法连接,室温反应4h左右,用pH6.0的PBS 4℃透析48h,计算人工结合抗原浓度和半抗原的结合比,AMPI-BSA、AMPI-HSA、AMPI-KLH结合比分别为118、44、2192,并用SDS-PAGE进行鉴定,结果表明成功将AMPI连接到载体蛋白上,制备了人工结合抗原。用制得的人工结合抗原和等量弗氏佐剂（FA）混合,釆用小剂量,延长免疫时间和免疫间隔的长程免疫法免疫8周龄Balb/c小鼠,免疫间隔1个月左右,免疫5～6次,免疫时间在5～6个月。取免疫Balb/c小鼠的脾细胞和SP2/O用50%聚乙二醇（PEG 4000）融合细胞,用建立的间接ELISA方法,筛选阳性克隆细胞孔,经过3次有限稀释法克隆和亚克隆,得到2株能够分泌抗AMPI抗体的杂交瘤细胞株,分别命名2D5、4C5。经鉴定2D5、4C5染色体数目分别为95.6条、96.9条;上清效价分别为:1∶1024、1∶512;腹水的效价分别为:1∶102400、1∶204800,提纯后的腹水的效价分别为:1∶102400、1∶102400;提纯腹水蛋白含量分别为5.16mg/mL、7.23mg/mL,亚型分别为IgG2b、IgG2a。阻断试验表明结果表明只有AMPI可以特异的阻断腹水,青霉素有一定的阻断效果,和氨苄青霉素同属β-内酰胺类抗生素的头孢氨苄和链霉素、诺氟沙星、红霉素一样也没有阻断效果。传代培养20代,3个月内复苏冻存3次,2D5、4C5能够比较稳定分泌抗体。 本论文在制备人工结合抗原和免疫的基础上,筛选到抗AMPI的McAb,为建立一种检测动物食品中PENs残留的快速灵敏的ELISA方法,或者和肢体金技术结合制备更加简便的检测试纸,进而为我国兽药残留监控提供技术支持。