西黄丸对荷瘤小鼠生存质量影响及抑瘤机理的实验研究

目的：揭示西黄丸对恶性肿瘤QOL生存质量的影响及探索西黄丸抑瘤机理。方法：(1)荷瘤动物生存时间及生存率的研究：KM小鼠50只,以体重分层随机分成5组,每组10只小鼠,分模型组、西黄丸低剂量组(相当于人每日用量3倍)、西黄丸中剂量组(相当于每日人用量9倍)、西黄丸高剂量组(相当于人每日用量18倍)、西药阳性药物对照组。根据相关文献方法[1J分别将液氮冻存的小鼠肝癌H22细胞进行复苏,经体外培养及增殖,待生长稳定后以5×106/m1的细胞量接种于KM小鼠腹腔内,待荷瘤小鼠长出适量癌性腹水后抽取腹水传代培养至5代,抽取此代小鼠无血性的癌性腹水,以供接种使用。实验时将第5代的荷瘤小鼠无血性的癌性腹水以无菌生理盐水调整肿瘤细胞数至5×106/m1,接种于KM小鼠腹腔内。待小鼠腹水长出时,于上述各组小鼠腹腔内接种0.1ml腹水。接种第3天后,给予各组相应药物,连续给药10天后停药。每天观测和记录荷瘤小鼠的生存状况,包括活动度、体重等,同时记录动物接种肿瘤细胞后的死亡时间。以模型组20%荷瘤小鼠存活时间不会超过4周为依据,故设定第29天终止实验,计算各组荷瘤小鼠的生存率。(2)对荷瘤动物免疫功能影响的研究：KM小鼠50只,以体重分层随机分成5组,每组10只小鼠,分模型组、西黄丸低剂量组(相当于人每日用量3倍)、西黄丸中剂量组(相当于每日人用量9倍)、西黄丸高剂量组(相当于人每日用量18倍)、西药阳性药物对照组。根据相关文献方法[1-2]分别将液氮冻存的小鼠肝癌H22细胞进行复苏,经体外培养及增殖,待生长稳定后以5×106/ml的细胞量接种于KM小鼠腹腔内,待荷瘤小鼠长出适量癌性腹水后抽取腹水传代培养至5代,抽取此代小鼠无血性的癌性腹水,以供接种使用。实验时将第5代的荷瘤小鼠无血性的癌性腹水以无菌生理盐水调整肿瘤细胞数至5×106/ml,接种于KM小鼠腹腔内。待小鼠腹水长出时,于上述各组小鼠腋下接种0.1ml腹水。于腋下接种第3天后,给予各组相应药物,连续给药10天,于第10天后,眼眶取血后处死动物,立即分离取出腋下肿瘤组织,进行称重,计算抑瘤率。并将动物血液进行体细胞亚群、TNF a的检测。(3)对受体型酪氨酸酶蛋白激酶的影响的实验研究：KM小鼠20只,以体重分层随机分成2组,每组10只小鼠,分模型组、西黄丸中剂量组(相当于每日人用量9倍)。根据相关文献方法[1-21分别将液氮冻存的小鼠肝癌H22细胞进行复苏,经体外培养及增殖,待生长稳定后以5×106/ml的细胞量接种于KM小鼠腹腔内,待荷瘤小鼠长出适量癌性腹水后抽取腹水传代培养至5代,抽取此代小鼠无血性的癌性腹水,以供接种使用。实验时将第5代的荷瘤小鼠无血性的癌性腹水以无菌生理盐水调整肿瘤细胞数至5×106/ml,接种于KM小鼠腹腔内。待小鼠腹水长出时,于上述各组小鼠腋下接种0.1ml腹水。于腋下接种第3天后,给予各组相应药物,连续给药10天,于第10天后,眼眶取血后处死动物,立即分离取出腋下肿瘤组织,提取小鼠H22瘤体组织中的RNA检测酪氨酸蛋白激酶Ron的mRNA表达水平,通过检测血清中酪氨酸蛋白激酶蛋白表达情况。结果：1)与模型组比,西黄丸低剂量组、西黄丸中剂量组、西黄丸高剂量组均能明显延长荷瘤小鼠的生存时间,明显提高长荷瘤小鼠的生存率；2)与模型组比,西黄丸低剂量组、西黄丸中剂量组、西黄丸高剂量组均可提高荷瘤小鼠的抑瘤率,提高荷瘤小鼠的免疫功能：3)与模型组比,西黄丸显著降低酪氨酸蛋白激酶Ron的mRNA表达水平,降低检测血清中的酪氨酸蛋白激酶蛋白含量。结论：西黄丸可明显提高肿瘤小鼠的生存质量,其抑制肿瘤的机理可能与降低酪氨酸蛋白激酶的mRNA表达水平有关和蛋白表达有关。