红花黄色素对新生大鼠缺氧缺血性脑病的保护作用

目的: 1、研究红花黄色素(SY)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑海马CA1区APE/Ref-1蛋白表达及神经细胞凋亡的影响。 2、探讨缺氧缺血后APE/Ref-1蛋白的表达在海马CA1区的变化与该区神经元凋亡之间的内在联系。 3、探讨红花黄色素对缺氧缺血性脑损伤神经细胞保护作用的可能机制。 方法: 新生7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,体重12-16g。通过随机数字表随机分为三组:(1)假手术组(24只):仅游离左右两侧颈总动脉,不结扎,直接缝合皮下组织及皮肤。不作注射药物等其他处理。(2)缺氧缺血(HIBD)组(24只):建立HIBD模型后不再作其他处理。(3)红花黄色素(SY)组(24只):建立HIBD模型后,分别在造模后即刻、造模后4h给予腹腔注射红花黄色素3mg/kg。每组分别于造模后6h、12h、24h、48h各处死6只,灌注固定后取脑组织常规石蜡包埋、切片,采用TUNEL方法检测海马CA1区神经细胞的凋亡,免疫组织化学染色法检测APE/Ref-1的表达。测定凋亡的阳性细胞数及APE/Ref-1表达的阳性细胞数。用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析,P<0.05表示差异有统计学意义。 结果: 1、TUNEL检测神经细胞凋亡的结果: (1)假手术组:新生大鼠脑海马CA1区可见少量凋亡的神经细胞,各时间点之间无显著差异(p>0.05)。 (2)HIBD组:凋亡细胞增加明显,且随时间变化呈上升趋势,差异有统计学意义(p<0.05)。与假手术组在12h、24h、48h相比,差异有统计学意义(p<0.05)。 (3)SY组:在6h凋亡的细胞数比HIBD组在6h凋亡的细胞数减少,但差异无统计学意义(p>0.05)。在12h、24h、48h凋亡的细胞数则比HIBD组减少明显,差异有统计学意义(p<0.05)。 2、免疫组织化学染色法检测APE/Ref-1表达的结果: (1)假手术组:新生大鼠脑海马CA1区可见APE/Ref-1广泛表达,各时间点之间无显著差异(p>0.05)。 (2)HIBD组:APE/Ref-1表达下降明显,差异随时间变化有统计学意义(p<0.05),与假手术组相比差异有统计学意义(p<0.05)。 (3)SY组:在6h,APE/Ref-1表达的阳性细胞数与假手术组相比,差异未见有统计学意义。在各时间点APE/Ref-1表达下降程度则均比HIBD组明显减轻,差异有统计学意义(p<0.05)。 3、通过对比海马CA1区神经细胞凋亡与APE/Ref-1表达的阳性细胞的变化趋势:随着APE/Ref-1表达的阳性细胞数的减少,海马CA1区凋亡的神经细胞逐渐增多。 结论: 1、红花黄色素能明显抑制缺氧缺血后APE/Ref-1表达的下降,明显减少神经细胞的凋亡,对神经系统具有保护作用。 2、APE/Ref-1的表达可能在抗神经细胞的凋亡中起着重要的作用。 3、红花黄色素对缺氧缺血新生大鼠的脑保护作用机制可能与抑制APE/Ref-1表达的下降,从而减少神经细胞的凋亡有关。