菌株TR-20对三七中人参皂苷转化的研究及转化产物的分离纯化

本论文从培养人参的土壤中筛选出23株菌。能够转化三七中人参皂苷为稀有、高活性人参皂苷的微生物菌株有9株,其中以菌株TR-20的转化作用最强。本论文用薄层层析法和高效液相色谱法定性、定量分析三七中人参皂苷及其转化产物。最终确定了较为适宜的薄层层析展开剂:氯仿:甲醇:水=40:10:1;并且建立了最佳的HPLC检测条件:色谱柱:Phenomex C18柱(250mm×4.6mm,5μm );流动相:乙腈(A):水(B),梯度洗脱。柱温:30oC;检测波长:203nm;流速:1.0ml/min;进样量20μl。 通过对菌株TR-20的形态和培养特征观察,结合分子生物学方法进行鉴定,鉴定结果为:菌株TR-20属于半知菌纲(Fungi Imperfecti)、壳霉目(Sphaeropsidales)、杯霉科(Discellaceae)、棒曲霉属(Aspergillus sp)。利用C18反相柱层析和硅胶柱层析两个方法相结合,分离得到2个纯度较高的目的样品,通过TLC、HPLC两种方法对样品进行分析鉴定,确定其分别为人参皂苷Rh1和人参皂苷Rg3。用HPLC方法对其进行纯度测定,测得人参皂苷Rh1纯度为96.4%,人参皂苷Rg3的纯度为97.8%。 为了进一步提高转化产物人参皂苷Rh1和人参皂苷Rg3的产量,本研究进行了培养基和发酵条件的初步优化。最佳组合为:PDA转化培养基,pH等于5,培养温度为26℃,摇床转速为220r/min,培养天数为7天。