茯苓化学成分及质量控制方法研究

本论文分为三个部分： 第一部分文献综述 茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf的干燥菌核。性平,味甘、淡,归心、肺、脾、肾经,功效利水渗湿、健脾、宁心安神。用于水肿尿少、痰饮眩悸,脾虚食少,便溏泄泻,心神不安,惊悸失眠等症。本论文共查阅138篇相关文献,对茯苓的化学成分、药理作用及质量控制现状进行了综述,归纳了目前已报道的茯苓多糖24个、三萜类化合物83个。此外,茯苓中还含有甾体类、挥发性成分、脂肪酸和氨基酸等成分。在药理活性方面,分别总结了茯苓两大主要成分——多糖和三萜的活性,二者均具有调节免疫、抗肿瘤、抗炎、保肝等多方面作用,在临床上应用广泛。质量控制方面,目前主要集中在有效成分的含量及药材的指纹图谱研究。 第二部分茯苓化学成分研究 采用色谱法对中药茯苓的化学成分进行了分离纯化,分离得到4个化合物。通过理化方法、色谱及波谱方法鉴定了4个化合物,分别为：橙皮苷(hesperidin)、原儿茶酸(protocatechuic acid)、孕甾-7-烯-2p,3a,15a,20(S)-四醇(pregn-7-ene-2β,3a,15a,20(S)-tetrol)、苯丙氨酸(phenylalanine)。其中橙皮苷、原儿茶酸和苯丙氨酸3个化合物为首次从茯苓属中分离得到。 第三部分茯苓药材质量控制方法研究 建立了15个不同产地茯苓药材的HPLC指纹图谱,作为控制药材质量的定性指标。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对15个不同产地茯苓药材的指纹图谱进行了相似度分析,标定出19个色谱峰为共有峰,15批药材的相似度在0.985-0.860之间,其中10批药材的相似度在0.90以上,6批药材的相似度在0.95以上。聚类结果显示,15批药材聚为3类,没有显著的地域性特征。在主成分分析中,提取了6个主成分,累计贡献率为91.647%,其中第一主成分贡献率为31.869%。19个共有峰中对第一主成分贡献率最大的5个色谱峰分别为6,13,4,7,15号峰,鉴定为化合物6a-羟基去氢茯苓酸、3-表去氢土莫酸、3-酮基-16a,25-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24(31)-三烯-21-酸、3-酮基-6,16a-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸、去氢茯苓酸,这5个化学成分的含量对不同产地茯苓药材的质量影响最大,可能也是影响药材聚类结果的主要原因。 采用HPLC/MSn对茯苓药材指纹图谱的共有峰进行定性归属,鉴定了19个共有峰中的17个,分别是：29-羟基去氢土莫酸(色谱峰1)、5a,8a-过氧化去氢土莫酸(色谱峰2)、6a-羟基猪苓酸C(色谱峰3)、3-酮基-16a,25-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24(31)-三烯-21-酸(色谱峰4)、3p,16a-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸(色谱峰5)、6a-羟基去氢茯苓酸(色谱峰6)、3-酮基-6,16α-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸(色谱峰7)、去氢土莫酸(色谱峰8)、3-酮基-6,16a-二羟基-羊毛甾-8,24二烯-21-酸(色谱峰10)、猪苓酸C(色谱峰12)、3-表去氢土莫酸(色谱峰13)、3β-羟基-16α-乙酰氧基-羊毛甾-7,9(11),24(31)-三烯-21-酸(色谱峰14)、去氢茯苓酸(色谱峰15)、3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸(色谱峰16)、3-表去氢茯苓酸(色谱峰17)、3β-对羟基苯甲酰基-去氢土莫酸(色谱峰18)、去氢依布里酸(色谱峰19)。此外,离子流图中还显示了4个仅有末端吸收的色谱峰,经解析鉴定其中3个为16α-羟基-3-氢化松苓酸(色谱峰a1)、土莫酸(色谱峰a2)、茯苓酸(色谱峰a4)。指纹图谱共有峰的定性归属,可以为不同产地茯苓药材的质量控制提供依据。 首次建立了测定茯苓中茯苓酸和去氢依布里酸含量的HPLC方法,并测定和比较了15个不同产地药材中2种成分的含量。茯苓酸、去氢依布里酸的回归方程分别为Y=49140X+75835(r=0.9994)、Y591020X-6847.4(r=0.9996),茯苓酸和去氢依布里酸分别在0.424μg-3.392μg、0.0458μg-0.458μg范围内成线性。茯苓酸和去氢依布里酸的平均加样回收率分别为101.85%、100.95%,RSD分别为2.43%和1.58%。15批茯苓药材中茯苓酸和去氢依布里酸的含量测定结果表明,该方法简便、快速、可靠且重现性好,可作为茯苓药材中茯苓酸和去氢依布里酸的含量测定方法。 创新点： 1.从茯苓的非多糖水提部位分离鉴定了4个化合物,即：橙皮苷、孕甾-7-烯-2β,3α,15α,20(S)-四醇、原儿茶酸、苯丙氨酸。其中橙皮苷、原儿茶酸和苯丙氨酸3个化合物为首次从茯苓属中分离得到。 2.首次建立了茯苓药材中茯苓酸和去氢依布里酸的HPLC含量测定方法,并对15个不同产地茯苓药材中2个成分的含量进行了测定和比较,为不同产地茯苓药材的质量控制提供依据。