针刺对脑缺血再灌注大鼠GAP-43和Caspase-3表达水平的影响

目的:观察针刺对脑缺血再灌注大鼠神经生长因子(Growth associated protein-43,GAP-43)和半胱天冬酶(Caspase-3)表达水平的影响,探讨针刺治疗脑缺血再灌注损伤的神经学作用机制,为临床治疗提供新的理论和实验依据。方法:选取30只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(n=6)、手术组(n=24)。手术组在经典Longa线栓法的基础上进行改良制备右侧大脑中动脉闭塞(Middle cerebr al artery occlusion,MCAO)大鼠模型,栓塞2h后,取出栓子,制成脑缺血再灌注模型(死亡7只.失败5只),存活大鼠进一步分成缺血组和电针组,每组6只。假手术组单纯分离右侧颈总、颈外和颈内动脉,不结扎。电针组给予电针大鼠“百会”、“印堂”、双侧“足三里”穴,每日一次,每次20min,共持续14d;缺血组以及假手术组仅束缚不予干预措施。造模成功后及治疗两周后处死前24h内分别进行大鼠神经功能缺损情况评分,处死所有大鼠后采用免疫组化及免疫印迹法检测各组缺血区脑组织中GAP-43、Caspase-3的蛋白表达水平,用免疫荧光染色法检测共表达情况并计算平均细胞数。结果:1.假手术组大鼠无神经功能损伤的体征,手术组大鼠神经功能损伤体征明显,和假手术组大鼠相比神经功能缺损评分差异有显著性差异(P<0.01),说明大鼠缺血模型制备成功;治疗后电针组的神经功能评分低于缺血组(P<0.01)。2.造模后的大鼠在转棒上停留时间明显不及假手术组,有显著性差异(P<0.01),与缺血组相比,电针组大鼠停留在转棒上的时间明显延长,有显著性差异(P<0.05)。3.与假手术组相比,缺血组大鼠脑组织内的Caspase-3蛋白表达含量明显上调(P<0.01),GAP-43蛋白表达水平急剧下降(P<0.01)。电针组的Caspase-3蛋白表达量略高于假手术组,明显低于缺血组(P<0.01);与缺血组相比,电针组的GAP-43蛋白含量显著上升(P<0.05)。4.免疫组化结果显示:手术后缺血组的GAP-43阳性细胞数急剧下降(P<0.01),治疗后电针组则可见胞浆棕褐色的大量强阳性信号,与缺血组比较,电针组GAP-4表达明显增多(P<0.05);手术后可见缺血组与电针组Caspase-3阳性细胞均大幅增长,呈深棕色强阳性信号,治疗后与缺血组比较,电针组阳性细胞表达数明显下降,有显著性差异(P<0.01)。5.免疫荧光结果显示:造模手术后,可见胞浆成蓝染具备细胞形态的Caspase-3阳性细胞爆发式地增长,电针治疗后又明显下降(P<0.05);GAP-43阳性细胞为具有绿色胞浆的阳性细胞,大量散在于健康大鼠脑组织内,造模后,可见其数量急剧减少,治疗后,又恢复至正常水平(P<0.01)。结论:1.电针“印堂”、“百会”、“足三里穴”可以改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损的病理状态。2.电针“印堂”、“百会”、“足三里穴”可以提高脑缺血再灌注大鼠运动能力。3.电针“印堂”、“百会”、“足三里穴”可提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中的G AP-43同时降低Caspase-3的表达含量,抑制神经细胞凋亡同时加速神经细胞的修复和再生。