RAPD和ISSR标记在海带种质及其遗传多样性研究中的应用

本研究表明,采用CTAB缓冲液 [2 % CTAB (w/v), 1.4 M NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0) 和 20 mM EDTA] 提取新鲜的海带配子体的DNA,可以获得理想的结果。提取的DNA长度约为23kb,A260/A280的比值平均为1.6。用该法提取的DNA可用于限制性酶酶切,ITS特异性扩增及RAPD扩增。 运用RAPD分析技术,对33个海带配子体进行了种质鉴定,筛选出的18条随机引物共扩增出233个位点,从中选择了27个多态性位点作为构建海带种质的指纹图谱的候选标记,利用计算机程序分析,从27个位点中,又优选出了7个RAPD标记,构建了33个配子体的指纹图谱。在此基础上,将3个海带配子体特异的RAPD片段成功地转化为SCAR标记。对所获得的一个SCAR标记进行了Southern杂交分析。本研究表明,利用RAPD分析技术对海带进行种质鉴定,并且利用SCAR标记对海带进行分子辅助选育是可行的。 应用ISSR标记方法,对10对海带配子体的遗传多样性进行了研究。通过筛选,获得10条ISSR引物,通过扩增得到58个位点,其中34个位点呈多态性。根据Dice常数计算所得的遗传距离为0.006～0.223。根据UPMGA构建了树状表征图,结果表明多数来源于同一品系同一棵海带的雌、雄配子体均能聚类在一起;10对海带配子体可被划分为4个群,这与其分类地位基本一致。最大的一个类群包括6对海带配子体细胞系,它们均是以日本海带(Laminaria japonica)为亲本,通过连续自交和人工杂交筛选所获得。通过克隆测序,验证了来源于引物852的一个单态性位点的4条扩增片段的同源性。基于ISSR分析,本研究获得了一对配子体的特异性标记,但是SCAR标记转化未能成功。这表明了ISSR标记可用于分析海带种质及其遗传多样性。