目的：
评估补肾活血复方对老年性膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis, KOA)(?)临床疗效和对滑液来源间充质干细胞(Synovial fluid-mesenchymal progenitor cells, SF-MSCs)增殖、抗炎能力的影响,探讨补肾活血法治疗KOA可能的作用机制。
方法：
临床部分：筛选2010.12～2013.1肾虚血瘀型的早期KOA患者进行研究观察,设中药组、中西组、对照组,采用随机对照法,每组观察各34例,中药组每日给予补肾活血复方汤剂口服一次,对照组以塞来昔布0.2g每日两次口服,中西组为每日给予补肾活血复方汤剂口服一次+口服塞来昔布0.2g每日两次,观察治疗6周后WOMAC和中医肾虚血瘀证候评分变化,以ELISA法测定治疗前后患者关节液IL-1β、IL-8、IL-10、TNFα含量的变化。
实验部分：抽取正常人(?)(?)KOA患者膝关节液各5份样本,分离、提纯贴壁细胞,并以流式细胞仪进行鉴定,确定其为SF-MSCs;以低、中、高浓度的补肾活血复方给予SD大鼠灌胃4天取含药血清,设低、中、高浓度及空白对照4组,以MTT法检测不同浓度的含药血清对SF-MSCs增殖活性的影响,以ELISA法测定不同浓度含药血清对SF-MSCs IL-1β、IL-8、IL-10、TNF-α含量的变化。
结果：
临床部分：中药组纳入统计30例,中西组纳入统计29例,对照组纳入统计32例。三组患者在年龄、病程之间的比较(P>0.05),差异无统计学意义；三组患者在X光分级的组间比较存在差异(P<0.05),但治疗前的WOMAC各项评分组间比较、中医证候各项评分组间比较、关节液TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-10组间比较(P>0.05),差异无统计学意义,三组具有可比性。
WOMAC评分方面,治疗前,中药组总评分平均18.57±7.35分,其中疼痛6.03±1.50分,僵硬0.27±0.45分,功能12.27±5.98分；中西组总评分平均20.93±4.10分,其中疼痛6.93±1.36分,僵硬0.14±0.35分,功能13.93±3.33分；对照组总评分平均21.25±6.88分,其中疼痛6.13±1.29分,僵硬0.19±0.40分,功能14.94±5.70分；治疗后,三组的WOMAC评分均有明显的下降,其中疼痛、功能项分值降低相对较为明显(P<0.01)；而僵硬项治疗前后三组均无明显变化(P>0.05),治疗后各项WOMAC评分组间比较,疼痛项方面,对照组与中西组得分均较中药组低(P<0.05),中西组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；功能项方面,三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
中医证候评分方面,治疗前,中药组中医证候评分5.07±1.14分,其中肾虚1.77±0.73分,血瘀1.87±0.78分,舌脉1.43±0.50分；中西组中医证候评分5.17±1.14分,.其中肾虚1.62±0.56分,血瘀2.00±0.80分,舌脉1.55±0.51分；对照组中医证候评分4.66±1.15分,其中肾虚1.50±0.51分,血瘀1.78±0.91分,舌脉1.38±0.49分。治疗后,三组的中医证候总评分均有明显的下降,差异具有统计学意义(P<0.01),中药组和中西组治疗后在肾虚、血瘀、舌脉项目的得分均有明显下降(P<0.01),而对照组只在血瘀项目与治疗前比较有明显的下降(P<0.01)。
炎症指标方面,治疗6周后,绝大多数患者经治疗后关节液明显减少,无法抽出足够的关节液供ELISA试剂盒检测。中药组仅有10位患者,中西组仅有7位患者,对照组仅有8位患者可以抽出足够的关节液供检测。从可以行前后配对的病例中统计,治疗前,中药组患者关节液中TNF-α35.14±2.42pg/ml,IL-1β89.42±3.71pg/ml, IL-880.60±6.86pg/ml,IL-10131.24±10.42pg/ml；中西组患者关节液中TNF-α36.19±3.54pg/ml,IL-1β88.27±2.10pg/ml,IL-881.32±8.06pg/ml,IL-10133.67±8.77pg/ml；对照组患者关节液中TNF-α35.19±2.40pg/ml,IL-1β85.59±3.42pg/ml,IL-881.44±5.OOpg/ml,IL-10137.53±12.42pg/ml.治疗后,三组的TNF-Q、IL-1β、IL-8含量均有不同程度的下降,治疗前后差异有统计学意义(P<0.05),三组的IL-10治疗后的含量较治疗前明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05),三组治疗后的四项指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。
实验部分：分离培养的第3代贴壁细胞呈CD90阳性,不表达CD34,可鉴定为SF-MSCs。MTT结果显示,培养第4天后正常人SF-MSCs和KOA患者的SF-MSCs均生长速率增快(P<0.05),培养的6天当中,KOA患者与正常人的SF-MSCs增长速度无明显差异(P>0.05)。补肾活血复方干预KOA患者SF-MSCs6天内,组间OD值比较未见明显差异(P>0.05)。ELISA结果显示,补肾活血复方含药血清能降低KOA患者的SF-MSCs培养液上清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的浓度,且降低炎症因子含量的能力与含药血清的浓度呈正相关(P<0.05)；补肾活血复方能提高KOA患者的SF-MSCs培养液上清IL-10抗炎因子的含量(P<0.01),其提高抗炎因子IL-10浓度的能力与含药血清的浓度呈正相关。
结论：
根据补。肾活血法所拟的补肾活血复方安全性好,具有良好的临床疗效,不仅能改善。肾虚血瘀型早期KOA患者的疼痛和功能,而且能改善肾虚血瘀的证候,其改善关节疼痛和功能的作用机制可能通过提高SF-MSCs的抗炎能力,减轻关节内的炎症反应实现。在治疗肾虚血瘀型早期KOA的过程中,配合服用塞来昔布等NSAIDs类药物镇痛效果更佳。
