咖啡酸在大鼠体内Ⅱ相代谢产物研究

咖啡酸(Caffeic acid, CA),化学名为：3-(3,4-二羟苯基)-2-丙烯酸,属于酚酸类化合物,广泛分布于小蓟、金银花、杜仲、牛至、茵陈、蒲公英等多种药用植物中。现代药理学研究表明咖啡酸具有广泛的生物活性,如降血压、降血糖、抗病毒、抗氧化等。咖啡酸的生物活性依赖于其在体内的吸收和代谢,然而国内外关于咖啡酸的代谢研究报道较少,仅有一些关于咖啡酸在大鼠体内药代动力学及用离体灌流模型评价其体内代谢方面的研究报道。为了进一步揭示咖啡酸在大鼠体内的代谢转化情况及代谢规律,并为其体内药效物质基础和新药开发提供依据,本文对咖啡酸在大鼠内的代谢产物进行了深入的研究。 我们首先采用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)法测定大鼠灌胃给予咖啡酸(100 mg·kg-1)后血浆和尿样中咖啡酸的Ⅱ相代谢产物,通过分子离子峰及碎片峰对其结构进行推测,推断出大鼠血浆中的咖啡酸Ⅱ相代谢物有四个,分别为：两个咖啡酸葡萄糖醛酸结合物和两个咖啡酸硫酸结合物；推断出大鼠尿样中咖啡酸Ⅱ相代谢产物有八个,分别为：两个咖啡酸甲基化物(阿魏酸和异阿魏酸)、两个咖啡酸葡萄糖醛酸结合物、两个咖啡酸硫酸结合物、阿魏酸葡萄糖醛酸结合物及其硫酸结合物、异阿魏酸葡萄糖醛酸结合物及其硫酸结合物。然后对灌胃给予咖啡酸溶液的大鼠尿样进行富集,以LC/MS/MS检测咖啡酸Ⅱ相代谢产物,采用大孔吸附树脂、ODS开放柱层析、凝胶柱层析色谱,制备高效液相色谱等方法对其进行分离纯化,结果从大鼠尿样中分离得到六个咖啡酸代谢产物,经IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC等波谱手段鉴定了其中五个Ⅱ相代谢产物的结构,分别为咖啡酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Caffeic acid-3-O-β-D-glucuronide)、咖啡酸-4-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Caffeic acid-4-O-β-D-glucuronide)、咖啡酸-3-O-硫酸酯(Caffeic acid-3-0-sulfate)、咖啡酸-4-O-硫酸酯(Caffeic acid-4-O-sulfate),阿魏酸(ferulic acid)。以上五个咖啡酸的Ⅱ相代谢产物首次从大鼠尿液中分离获得并对其结构进行了鉴定。 本文首次对咖啡酸的Ⅱ相代谢产物进行了系统研究,结果证实咖啡酸在大鼠体内代谢广泛,通过对咖啡酸的Ⅱ相代谢产物进行结构鉴定,发现咖啡酸葡萄糖醛酸结合物是咖啡酸在大鼠体内主要的Ⅱ相代谢产物。本研究分离得到的Ⅱ相代谢产物为咖啡酸在大鼠体内的定性定量研究提供了对照品,同时为阐明咖啡酸在大鼠体内代谢规律及新药开发提供了理论依据,也为揭示其它酚酸类化合物的体内代谢规律提供了研究基础。