灰树花活性成分的分离鉴定及抗氧化作用研究

灰树花是一种珍稀的食药用菌,又称为贝叶多孔菌或舞茸。灰树花营养丰富,多种营养素都比其他的食用菌高。灰树花具有抗癌、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、治疗肝炎、降血脂以及降血糖等功效,是一种具有很强药用价值的食药用菌。本课题以灰树花子实体为材料,从灰树花中提取抗氧化活性成分,利用高效液相和质谱联用技术初步探究了灰树花的抗氧化活性成分。1.从灰树花子实体中提取灰树花抗氧化活性物质,通过测定总还原力为跟踪指标,利用单因素和正交实验优化了灰树花抗氧化活性物质的提取工艺,最佳提取条件为:提取时间2.5h,提取温度70℃,料液比1:50。2.对灰树花抗氧化活性成分的分离纯化得到了不同的组分,包括了经琼脂糖凝胶DEAESepharoseFastFlow柱层析分级得到了四个不同多糖组分,分别为GFP Ⅰ,GFPⅡ,GFPⅢ和GFPⅣ组分;NKA-Ⅱ型大孔树脂动态吸附和解吸附得到了灰树花三个不同的多酚组分,分别为20%乙醇、40%乙醇和60%乙醇解析物。3.对比了分离得到的不同灰树花活性组分DPPH清除率、羟自由基清除率以及总还原力为指标的抗氧化作用,结果表明灰树花多酚的抗氧化作用优于灰树花粗多糖的抗氧化作用,而经过纯化的灰树花多糖表现出比较小的抗氧化作用。又对灰树花多酚不同组分的抗氧化作用作了研究,结果表明,40%乙醇解析物的抗氧化作用强。4.通过流动相的选择,流动相配比和时间程序的选择,优化了高效液相色谱分析条件,构建了灰树花多酚测定的高效液相色谱方法。接着利用最优的高效液相色谱方法分析了分离得到的不同灰树花多酚组分,显示中等极性的多酚具有更好的抗氧化活性。5.对灰树花抗氧化多酚组分采用HPLC-MS联用的方法,采用最优的液相分离条件,同时进行波长扫描和质谱测定,获得了不同的组分,通过对应的质谱图分析可推测出一些活性多酚组分,有羟基丁二酸(marlic acid),香豆酸(Coumaric acid),白藜芦醇(resveratrol),二羟基苯乙酸,咖啡酸(caffeic acid),4-羟基苯甲酸(4-hydroxy-benzoic acid)等。