蛋白核小球藻多糖制备及其增强免疫功能的研究

本文研究了用膜分离技术从单细胞绿藻蛋白核小球藻粉中分离提取蛋白核小球藻多糖的技术,并采用凝胶柱层析法将其纯化分离成两个组分,再用高效液相色谱法测定其相对分子量,用气相色谱法分析其单糖组成,用红外光谱法分析链接方式及官能团。并且,又研究了蛋白核小球藻粗多糖的巨噬细胞吞噬作用及其体液免疫和细胞免疫的功能。结果如下: 通过将提取影响因素用L16（4～5）正交试验研究,结果表明:用超声波1000W破碎800s、100℃沸水浴提取4小时、加入的乙醇在多糖溶液中浓度为80%时,蛋白核小球藻多糖的得率最高;在此最佳条件下用3%的三氯乙酸除蛋白时多糖纯度最高;用膜分离技术分离纯化蛋白核小球藻多糖时,宜先用0.1μm的微滤膜过滤（压力0 Psi,温度25-40℃）,再用3K的超滤膜过滤（温度25-40℃,进口压15 Psi,回流压11 Psi）,将浓缩液再用80%的乙醇溶液进行沉淀,可以得到得率为4.76%,纯度为60.03%的蛋白核小球藻多糖。将蛋白核小球藻多糖用琼脂糖凝胶层析分离后可得到两种分子量不同的组分。 用高效液相色谱法测定了蛋白核小球藻多糖两个精制组分的相对分子量,CPS1和CPS2的峰值分子量分别为81877Da和1749Da。再用气相色谱法分析其单糖组成,发现其主要单糖组成成分为甘露糖。另外,通过红外吸收光谱分析可知,两个样品均呈现出多糖的典型特征吸收峰,均以α-吡喃糖为单体构成多糖组分。 用动物试验评价蛋白核小球藻多糖的增强免疫力的功能。按0.4ml/20g·BW的量灌胃给予小鼠100mg mL-1、50mg mL-1和25mg mL-1三个剂量的蛋白核小球藻多糖溶液,连续进行30天。测定各实验组的体重、相关脏器重,迟发型变态反应（DTH）、血清凝集素抗体积数和吞噬细胞作用。结果表明,在100mg mL-1和50mg mL-1的剂量下,小鼠的吞噬指数、吞噬率和迟发型变态反应（DTH）、抗体积数与对照相比,差异都十分显著（P<0.05）;而在25 mg mL-1的剂量下,小鼠只在非特异性免疫和体液免疫（即在吞噬指数、吞噬率和抗体积数）中与对照相比差异显著（P<0.05）。这表明,蛋白核