目的:在前期临床工作的研究上,遵照中药6类新药和《中药、天然药物技术研究指导原则》有关技术要求,开展三黄益肾颗粒的制备工艺、质量标准及初步稳定性,并进行制剂的初步药效学研究,为最终开发成安全有效、服用携带方便的一种治疗慢性肾脏病的中药新制剂奠定基础。方法:1.制备工艺研究(1)工艺路线筛选:采用慢性肾衰竭(CFR)大鼠模型,结合文献研究的结果,筛选三黄益肾颗粒提取物的制备工艺路线。(2)提取工艺研究:采用单因素比较法,以挥发油得率为指标,优化肉桂挥发油提取工艺;单因素比较结合正交试验法,以固形物得率、结合蒽醌、丹参酮ⅡA的提取率为考察指标,优化大黄、丹参药材的乙醇提取工艺;以固形物总质量、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的提取率为考察指标,优化大黄、丹参药渣与黄芪等其余药材的水提取工艺。(3)浓缩、干燥工艺研究:以结合蒽醌、丹参酮ⅡA的保留率为指标,优选乙醇提取液的回收乙醇(浓缩)方法及其浸膏的真空干燥工艺;以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的保留率为指标,优选水提取液的浓缩方法及其浸膏的喷雾干燥工艺。(4)制剂成型工艺研究:测定提取物的吸湿速率、临界相对湿度和通过粉体学性质;以物料吸湿增重百分率、溶化率和成型率为指标,优选填充剂种类;以颗粒得率为指标,优选干式制粒工艺条件;以颗粒的临界相对湿度为指标,确定制剂成型时的环境湿度要求;以颗粒吸湿增重百分率为指标,优选直接接触药品的包装材料的种类。(4)依据小试优选的工艺参数,开展三批中试验证试验。2.初步药效学研究以CFR大鼠模型血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)值为评价指标,初步评价所研制剂有效性。3.质量标准研究采用薄层鉴别法(TLC),建立制剂中黄芪、大黄、丹参、熟地黄等的鉴别方法;采用高效液相法(HPLC),建立制剂中黄芪甲苷和丹参酮ⅡA含量测定方法;依照《中国药典》2015年版四部通则0104项下规定,建立制剂的性状、水分、粒度、溶化性等标准。开展制剂的常温稳定性和加速稳定性试验,初步评价所研制剂在上市包装条件下的稳定性,初步确定其有效期。结果:1.制备工艺研究(1)优选的制备工艺路线为:肉桂提取挥发油,大黄、丹参采用乙醇回流提取、浓缩、干燥制成提取物;肉桂、大黄、丹参药渣与黄芪等其余药材煎煮、浓缩、干燥制成提取物,合并提取物,加辅料制成颗粒剂。(2)肉桂提取挥发油的优化工艺为:无需浸泡,药材加8倍水,蒸馏提取6 h,其发油提取率为0.92%。(3)大黄、丹参优选的提取工艺为:药材回流提取2次,每次加8倍体积80%乙醇,回流提取2 h,其丹参酮ⅡA与结合蒽醌的提取率分别为47.65%和54.63%,醇溶性固形物得率为18.48%;优选的浓缩方式为减压浓缩(浓缩条件为:-0.08 Mpa;55～65℃),其丹参酮ⅡA和结合蒽醌的保留率分别为86.30%和84.30%;优化的浸膏干燥方式为真空干燥(-0.08MPa,50～80℃),铺盘厚度不大于0.7cm;其丹参酮ⅡA和结合蒽醌的保留率分别为72.08%和69.12%。(4)肉桂、大黄、丹参药渣与黄芪等其余4味药材优选的水提取工艺为:煎煮2次,每次加10倍量水,煮沸提取2 h,其黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的提取率分别为56.03%和68.18%,水溶性固形物得率为30.34%;优化的浓缩方式为减压浓缩(-0.08MPa,55～75℃),其黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的保留率分别为85.92%和78.40%;优化的浸膏干燥方式为喷雾干燥(进风温度为175±5℃,出风温度为85±5℃,浓缩液的相对密度为1.06～1.10(60℃),其黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷保留率分别为83.91%和77.64%。(5)药材提取物的吸湿率为22.61%,临界相对湿度为58%,松密度为0.68 g·mL-1,振实密度为0.73 g·mL-1,成型工艺优选的填充剂为麦芽糊精,采用干式制粒法,物料水分控制在3.0～5.0%之间,所得颗粒的休止角为36.2°,吸湿率为13.81%,临界相对湿度为61%,松密度为0.78g·mL-1,振实密度为0.85 g·mL-1;选用PET/AL/PE结构的纯铝药用复合膜进行封装;经三批中试验证试验证明,该制备工艺合理可行,黄芪甲苷的转移率为66.12%～66.64%,丹参酮ⅡA转移率为32.02%～32.23%。2.初步药效学研究本工艺方法制备的三黄益肾颗粒对CFR大鼠模型的BUN值和Cr值有明显的降低效果。2.质量标准及稳定性研究3.所建立的制剂中丹参、黄芪、大黄、肉桂的TLC鉴别方法,经方法学考察表明,其方法稳定无干扰;所建立的制剂中黄芪甲苷与丹参酮ⅡA的含量测定方法,方法学考察表明,其方法稳定无干扰,同时规定了产品含量的最低限量。依据制剂通则(《中国药典》2015年版四部通则0104)项下的要求,进行了制剂的性状、装量差异、粒度、溶化性、水分、微生学检验,均符合颗粒剂的相关要求。经6个月常温稳定性试验和加速稳定性试验考察结果显示,本品在上市包装条件下稳定,其有效期初步确定为2年。结论:三黄益肾颗粒的制备工艺有效、合理、稳定、质量可控,能达到预期的研究目标,为进一步开展临床试验研究和大工业生产提供了有效的实验依据。
