葛根素口服微乳生物利用度及其吸收机制初步研究

一、目的 通过葛根素口服微乳在大鼠体内的生物利用度以及在Caco-2细胞模型中摄取特性的研究,初步探讨其吸收机制。 二、方法 1葛根素口服微乳大鼠体内生物利用度研究 SD大鼠分别以30 mg·kg-1的剂量灌胃给予o/w和w/o微乳,另设对照组,灌胃给予相同剂量的葛根素溶液,于不同时间点眼眶后静脉丛采血,HPLC法测定血浆中药物浓度,采用非房室模型求算药动学参数。 2葛根素口服微乳在Caco-2细胞模型中摄取特性的研究 采用MTT法确定葛根素微乳体外最大非细胞毒剂量;用HPLC法测定Caco-2细胞中葛根素的浓度,用考马斯亮兰法测定Caco-2细胞中蛋白含量;考察作用时间、pH及药物浓度对葛根素微乳在Caco-2细胞中摄取的影响。 三、结果 1葛根素口服微乳大鼠体内生物利用度研究 1.1大鼠血浆中葛根素测定方法的建立 葛根素在0.10～10.00μg·mL-1浓度范围内线性关系良好（r=0.9996）,最低定量限为0.10μg·mL-1,提取回收率为79.0～83.0%,方法回收率为97.9-106.7%,日内和日间精密度均小于6%。 1.2主要药动学参数及相对生物利用度 大鼠灌胃葛根素溶液、o/w和w/o微乳后主要药代动力学参数如下:tmax分别为0.27±0.08、1.35±1.03和3.67±0.52 h;Cmax分别为1.315±0.821、1.719±0.475和2.154±0.840μg·mL-1;AUC0→t分别为1.59±0.37、7.02±2.89和11.33±2.53μg·h·mL-1;AUC0→∞分别为1.83±0.41、7.44±2.89和14.96±3.98μg·h·mL-1;MRT分别为1.58±0.62、3.28±0.85和7.45±4.11 h。o/w微乳的相对生物利用度是葛根素溶液的407%,w/o微乳的相对生物利用度是葛根素溶液的817%。 2葛根素口服微乳在Caco-2细胞模型中摄取特性的研究 2.1细胞毒性试验 葛根素微乳浓度小于208μg·mL-1时,细胞存活率大于90%,选择药物浓度为208μg·mL-1作为摄取最高浓度。 2.2 Caco-2细胞中葛根素浓度测定方法建立 葛根素在0.0102～10.2μg·mL-1浓度范围内线性关系良好（r=0.9998）,最低定量限为0.0102μg·mL-1,提取回收率为95.8%～97.0%,方法回收率为998%～100.6%,日内、日间精密度均小于7%;细胞蛋白含量测定的线性范围为10～100μg,r=0.992。 2.3葛根素口服微乳在Caco-2细胞模型中摄取特性研究 Caco-2细胞药物摄取量随着摄取时间的延长而逐渐增加,在120min时,达到最大,以120 min作为细胞摄取的时间;在pH 6.0和pH 7.4条件下,52、104、208μg·mL-1的葛根素溶液和葛根素微乳的药物摄取量没有明显差别,选择生理条件的pH 7.4作为细胞摄取试验的pH条件;在26～208μg·mL-1浓度范围内,葛根素摄取量与葛根素的浓度成正比,葛根素的摄取呈浓度依赖性。在低浓度时,溶液组与微乳组药物摄取量没有差别,但在高浓度时,溶液组的药物摄取量要显著高于微乳组。 四、结论 1.建立的葛根素在大鼠血浆以及在Caco-2细胞中的测定方法,回收率和精密度高,稳定性好,可用于葛根素口服微乳在大鼠体内的生物利用度以及在Caco-2细胞模型中的摄取特性研究。 2.葛根素微乳与葛根素溶液相比,微乳促进了葛根素的吸收,大幅度提高了葛根素的生物利用度。葛根素生物利用度不佳的根本原因不是葛根素溶解度低,而是药物渗透性差。微乳促进葛根素吸收在于微乳存在特殊的吸收机制,微乳跨细胞膜转运途径可能不是葛根素微乳的主要吸收途径,微乳以完整的微粒经淋巴转运或者细胞间转运的可能性更大。