茯苓多糖散的临床前和临床研究

茯苓为传统中药,是真菌茯苓的干燥菌核。中医认为,茯苓性平,味淡、甘,归脾、肾、心、肺经,具有健脾、利水渗湿功效。临床上用于治疗痰饮眩悸、脾虚少食、水肿尿少、心神不宁、惊悸失眠等症。茯苓的主要成分为茯苓多糖和三萜。研究表明,多糖类化合物能激活自然杀伤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞;同时,可以促进细胞因子生成、激活补体等,通过多种途径,发挥对免疫系统的调节作用。目前报道,茯苓多糖具有保肝脏及抗肿瘤作用,有明确的增强免疫作用。茯苓有增强机体免疫功能。本课题通过茯苓多糖散的临床前药效、安全毒理学研究,对靶动物的毒性作用和临床上使用的效果的研究,为新兽药的开发提供较为全面的研究资料。本实验通过茯苓多糖散的药效学研究,确定茯苓多糖散的免疫增强功能；通过茯苓多糖散的小鼠经口急性毒性研究,确定茯苓多糖散的LDso；通过茯苓多糖散30天喂养试验,确定茯苓多糖散对大鼠产生的有害效应剂量、毒作用性质和靶器官,估计亚慢性摄入的危险性,为临床试验设计剂量和主要观察指标提供参考；通过茯苓多糖散靶动物安全性试验,评价猪对茯苓多糖散的耐受性情况,观察临床上猪过量使用茯苓多糖散时可能出现的毒性反应；通过茯苓多糖散临床疗效试验,探究不同剂量下茯苓多糖散对特异性免疫(猪瘟和伪狂犬)免疫消长的影响。本试验根据兽药注册办法和农业部442公告有关规定进行。1.茯苓多糖散的药效学研究本实验采用SPF级昆明种小鼠,用氢化可的松注射液制造免疫功能低下的动物模型。设置茯苓多糖散(以茯苓多糖计)高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)三个剂量组,另设左旋咪唑及黄芪多糖为阳性对照组、生理盐水为空白对照组。连续灌胃给予,14天后开始检测有关指标。实验结果以P<0.05判断为显著性差异,各剂量组与空白对照组比较,结果显示：茯苓多糖散三个剂量组均能显著提高免疫低下小鼠吞噬细胞的吞噬活性(P<0.05),吞噬细胞功能结果为阳性；茯苓多糖散中、高剂量组能显著刺激脾脏、胸腺重量的增加(P<0.05),茯苓多糖散中、高剂量组能显著促进免疫低下小鼠的迟发型变态反应(P<0.05),细胞免疫功能结果为阳性；茯苓多糖散三个剂量组均能显著提高小鼠的抗体生成细胞数(P<0.05),茯苓多糖散三个剂量组具有显著增强小鼠血清凝集素水平的作用(P<0.05),体液免疫功能结果为阳性。因此,可判定茯苓多糖散有一定的增强小鼠免疫功能的功效。2.茯苓多糖散急性毒性试验依据国家农业部442号公告和农业部兽医局2009年8月颁布的兽药急性毒性试验指导原则的方法,用SPF级KM小鼠进行了伏苓多糖散急性经口给药毒性试验。采用最大耐受量法,以0.4ml/10g·bw作为灌胃剂量,三次累计给予1.2ml/10g·bw。结果为：雌雄鼠急性经口MTD均≥10248mg/kg·bw(以茯苓多糖计)：根据兽药指导原则急性经口毒性试验分级标准评价,该受试样品为实际无毒级。3.茯苓多糖散30d喂养试验依据国家农业部442号公告和农业部兽医局2009年8月颁布的兽药30d和90d喂养试验指导原则的方法,用SPF级Wistar大鼠进行了伏苓多糖散经口给药30d长期毒性试验。选80只体重60～90 g Wistar大鼠,雌雄各半,随机分成一个空白对照组和三个剂量组,即0mg/kg·bw、427mg/kg、bw、854mg/kg·bw、1708mg/kg ·bw(以茯苓多糖计)。以20.0ml/kg·bw,作为灌胃剂量,每日1次,连续30d,空白对照组给予等容量的蒸馏水。结果表明：动物均未见明显的中毒症状和死亡。茯苓多糖散队大鼠体重、进食量、饲料利用率、血液生化、血液学、脏器重量、脏／体比值、病理组织学等指标与空白对照组比较,差异均无显著性,结果为未发现该样品有明显的毒性作用。4.茯苓多糖散靶动物临床安全性试验本实验将“杜-长-大”三元杂交断奶仔猪24头分为四组,每组6头,雌雄各半。分别饲喂空白饲料、每kg饲料添加100mg、300mg和500mg茯苓多糖散(以茯苓多糖计)的饲料。结果为：空白对照组猪未见明显中毒症状与死亡。受试样品各剂量组猪体重、饲料利用率、体温变化、血液学、血液生化等指标与空白对照组比较,差异无显著性(P>0.05),结果为未发现受试样品有明显的毒性作用。5.茯苓多糖散临床疗效试验试验选择60头健康猪分别免疫猪瘟、猪伪狂犬建立模型,进行验证茯苓多糖散对猪瘟和猪伪狂犬的临床疗效：另选择60头猪饲喂添加地塞米松磷酸钠的饲料,建立免疫低下模型,然后分别免疫猪瘟、猪伪狂犬建立模型,进行验证茯苓多糖散对猪瘟和猪伪狂犬的临床疗效。结果为：茯苓多糖散各剂量组与空白对照组相比,猪瘟与猪伪狂犬抗体水平均有显著提高(P<0.05)。其中以中剂量(100mg/kg)和高剂量(200mg/kg)(以茯苓多糖计)无显著性差异(P>0.05)。综上所述,本课题从药效,毒理,靶动物安全性、临床疗效等方面阐明了茯苓多糖散的免疫调剂活性以及临床作用效果。研究结果为茯苓多糖散在猪的有效性和安全性评价提供了全面的研究资料,为茯苓多糖散在猪的合理利用提供了科学依据,证实茯苓多糖散可作为一种安全、有效的新型中兽药应用于猪的生产及疾病防治。