葛根芩连汤干预非酒精性脂肪性肝炎的药效学研究

研究目的 非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH),属于代谢综合征之一,常与同属代谢综合征的高脂血症、2型糖尿病、肥胖等疾病并发和(或)相互转化。因此,防治NASH的理想药物应具有多靶点、多效能等特点,应能够在体内调节多个病理机制。但是,目前在现代医学中尚无防治该病的特效药物,且现有的治疗方案仅可单一调节NASH的某个发病机制。由此可见,寻找及开发新型多靶点、多效能的NASH治疗药物迫在眉睫。在前期研究中,本课题组采用临床流行病学调查及因子分析等方法,对NASH的病因、病机、证型及证候要素等进行了深入的研究,发现NASH的核心病机、主要证型及证候要素与湿热内蕴证2型糖尿病基本类似,符合“异病-同证-同治”的治疗原则。而在现代中医学中,葛根芩连汤是治疗湿热内蕴证2型糖尿病的经典方剂之一,由此本课题组推测葛根芩连汤可能具有防治NASH的功效。为验证该假说,本课题组选用高脂饮食诱导及MCD饮食诱导的两种NASH动物模型,系统观察了葛根芩连汤对NASH的治疗效果以及对胰岛素抵抗、脂肪代谢与沉积的影响,期望为开发防治NASH的新型特效药物提供新思路与实验数据。 研究方法 NASH动物模型的建立与评价：本实验以SD大鼠及C57BL/6小鼠为研究对象,分别喂以常见配方制成的高脂饲料及MCD饲料,SD大鼠跟踪检测其4周、6周、8周、10周、12周血清中的肝功能及血脂水平,C57BL/6小鼠跟踪检测其7天、14天、21天、28天、35天血清中的肝功能及血脂水平,并对各时间点的肝组织进行病理形态学观察及NAS评分,以获得上述两种模型合理、成熟、稳定的造模方法及周期,为后续的葛根芩连汤对NASH的药效学研究提供稳定的动物模型；并对两种模型的发生发展规律进行系统比较,为深入研究NASH病理机制提供实验基础。 葛根芩连汤干预NASH动物模型的药效学评价：本研究将正常的SD大鼠及C57BL/6小鼠分别随机分为正常对照组、NASH模型组、水飞蓟宾阳性药组、葛根芩连汤高剂量组、葛根芩连汤低剂量组5组。在上述模型实验结果的基础上,大鼠除正常对照组喂养普通维持饲料外,其他各组均喂养高脂饲料同时各给药组通过灌胃方式予以相应药物,持续8周；小鼠除正常对照组喂养MCS饲料外,其他各组均喂养MCD饲料,同时各给药组通过灌胃方式予以相应药物,持续14天。末次给药后禁食18h,取材,检测各组血清中肝功能、血脂及胰岛素抵抗水平,并对各时间点的肝组织进行病理形态学观察及NAS评分,以评价葛根芩连汤干预NASH的疗效及可能的药理机制。 研究结果 SD大鼠NASH模型建立与评价的实验结果显示,高脂饲料喂养SD大鼠4周后肝组织形成单纯性脂肪肝；6周后肝组织处于单纯性脂肪肝与NASH之间；8-12周后其肝组织处于稳定的NAS H阶段,故应在此阶段内展开NASH的发病机制及药效学研究。 C57BL/6小鼠NASH模型建立与评价的实验结果显示,MCD饲料喂养C57BL/6小鼠7天后,其肝组织处于单纯性脂肪肝与NASH之间；14-35天后其肝组织处于稳定的NASH阶段,故应在此阶段内展开NASH的发病机制及药效学研究。 葛根芩连汤干预NASH大鼠的实验结果显示,葛根芩连汤及水飞蓟宾均可显著降低高脂饮食大鼠血清中AST.ALT.CHO及LDL的含量,并可促进血清中HDL水平的升高；而对血清中空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及由此计算出来的HOMA-IR指数检测结果显示,葛根芩连汤对高脂饲料诱发NASH大鼠的胰岛素抵抗具有显著的改善作用；而肝组织病理学检测结果显示,葛根芩连汤可显著抑制肝细胞脂肪变性、气球样变及炎性细胞浸润。 葛根芩连汤干预NASH小鼠的实验结果显示,葛根芩连汤可显著抑制该模型小鼠肝组织脂肪样变的进程,在减少小粒状脂肪油滴的数量的同时,可保护中央静脉周围的正常肝细胞索状结构,防止空泡化的发生。但在血脂及胰岛素抵抗方面,该药未表现出明显的改善作用。 研究结论 葛根芩连汤对高脂饮食诱导的SD大鼠NASH模型及MCD饮食诱导的C57BL/6小鼠NASH模型均具有显著的干预作用,可影响脂肪代谢紊乱、炎性细胞浸润等多个病理环节,并可显著改善与人类营养过剩型NASH相似的大鼠NASH模型外周血中的胰岛素抵抗。由此,可推断出该药防治NASH的疗效确切,同时佐证了中医“异病—同证—同治”原则的正确性,可对葛根芩连汤进一步研究与开发,使其成为新型多靶点、多效能的NASH治疗药物。