苍术炮制前后正丁醇部位药效学及化学成分对比研究

苍术是临床上应用较多的一种饮片，生苍术温燥而辛烈，麸炒可缓和苍术燥性，增强健脾和胃的作用。该作用临床实践已证明，但其炮制机理尚不清楚，因此限制了苍术的进一步开发和应用。 苍术含挥发油和苷类等化学成分，前人多以挥发油为主要研究对象，生苍术及麸苍术单纯提取挥发油，炮制品挥发油含量明显降低；但是水煎煮苍术时发现，生品与炮制品之间水煎液中挥发油含量无明显变化。 基于苍术以上观点，本论文将着重研究苍术非挥发性成分。前期已对水部中的氯仿部位进行了深入探讨。此文将继续在麸炒苍术水煎液增效减燥药效变化和化学成分的变化的基础上，对正丁醇部位进行化学成分和药效等一系列研究。两者相结合全面阐述苍术麸炒的机理。 为深入探讨麸炒苍术的炮制机理，对苍术麸炒前后正丁醇部位、50%乙醇洗脱部位、水洗脱部位进行药效学研究。以湿阻中焦证大鼠为模型，选择小肠推进率、血清胃泌素水平为健脾指标；选取日代谢尿量、尿液AQP2含量为燥湿指标。结果显示正丁醇部位生、麸品组健脾两项指标与阴性组比较均有差异(p<0.05)；燥性指标结果，仅生品高剂量组较模型组有显著性差异(p<0.05)，而其他给药组较模型组无显著性差异；50%洗脱部位、水洗脱部位生品组、麸品组健脾两项指标与阴性组比较均有差异(p<0.05)；尿量指标阳性组较其它各组利尿作用显著，其它给药组较阴性对照组无显著性差异(P＞0.05)；各给药组AQP2含量较模型组均有所降低，并且生品组AQP2浓度较麸品组低。 采用c-kit免疫组化法更直观的观察苍术炮制前后50%乙醇洗脱部位、水洗脱部位对湿阻中焦证大鼠胃切片中Cajal间质细胞的分布。其中湿阻中焦证模型组（阴性组）大鼠胃切片c-kit阳性ICC染色浅，分布较少，而各给药组胃切片中c-kit阳性细胞较模型组显著增加（P＜0.05),苍术麸炒后50%乙醇部位，水部位高、低剂量组胃组织切片中c-kit阳性细胞数目较其生品组均增加（P＜0.05)，麸品组较生品组分布更广，说明炮制以后苍术的健脾作用显著。各组c-kit阳性细胞数目的差异，提示苍术麸炒后能明显改善湿阻中焦证大鼠的胃肠动力，与健脾指标小肠推进率与血清胃泌素（GAS）水平药效结果一致。 在苍术50%乙醇洗脱部位具有健脾作用的基础上，运用HPLC-ELSD分析苍术炮制前后50%乙醇洗脱部位化学成分的变化，苍术50%乙醇洗脱部位主要有2种成分变化较明显：其中一成分（A成分）经过麸炒后其相对含量增高，与生品相比含量增高了191.22%；另一成分（B成分）经过麸炒以后相对含量也增加，与生品相比含量增高34.99%。此两成分为目标化合物，在此成分分析的基础上，选用传统分离手段硅胶柱色谱、Toyopearl-凝胶柱色谱以及制备薄层色谱分离纯化有量变的50%乙醇部位中的A、B两成分，最终分离得到两个单体化合物，经氢谱和碳谱的结构解析，鉴定A成分为苍术苷A，B成分为β-胡萝卜苷。 综合苍术麸炒前后正丁醇部位的药效-化学成分对比研究，确定了正丁醇部位的药效，即增强健脾的作用，缓和生品的燥性。结合苍术麸炒前后正丁醇部位的药效差异，分离得到的两个量变较大的化合物苍术苷A及β-胡萝卜苷，可作为阐释麸炒苍术正丁醇部位药效变化的物质基础。 本实验通过健脾燥湿双重药理指标，验证了苍术麸炒以后可以增强健脾作用，缓和燥性。通过对苍术麸炒后药效-物质基础的研究，更加全面解释了苍术麸炒后水煎液增效减燥的炮制机理。