板蓝根多糖提取分离及其分子量测定的研究

板蓝根系常用中药,药材多以菘蓝干燥根入药。板蓝根味苦、性寒、归心、胃经。清热解毒、凉血利咽,主治外感风热、大头瘟毒、头面红肿、丹毒斑疹、咽喉肿痛等症。现代临床广泛应用于预防和治疗各种病毒和细菌所引起的感冒发热、流脑、肝炎、肺炎、扁桃体炎、腮腺炎、急性眼结膜炎和疱疹皮炎等。板蓝根具有较强的抗病毒活性,是公认的抗病毒中药,同时还具有抗菌消炎、免疫调节、抗内毒素、抗癌等作用。 板蓝根多糖是板蓝根中一类含量较多的成分,已有研究表明板蓝根多糖具有抗病毒、降血脂和免疫调节等作用,因此板蓝根多糖的提取分离及鉴定技术的研究具有较大的理论意义与应用价值,能为板蓝根多糖的功能食品与新药开发及板蓝根的质量控制提供技术理论基础。 本研究首先以均匀设计对板蓝根多糖的提取工艺进行优化,结果表明板蓝根多糖提取的最佳工艺条件为水提温度100℃、时间2.5 h和10倍的加水量,理论多糖得率约在13.8%～20.44%。本研究所得最佳工艺合理可行,能为板蓝根多糖提取的工业化生产与资源开发利用提供理论依据和工艺参考。 在最佳提取工艺的基础上,本研究进一步对板蓝根多糖的分离制备工艺技术进行了研究。经醇提除杂和水提醇沉后得到的板蓝根粗多糖(RIPⅠ),以闪式提取方式进行充分复溶后,通过静置冷析的方法将板蓝根粗多糖的成分分为冷水析出(RIPⅡ)及冷水易溶(RIPⅢ)两组成分,并对RIPⅢ组分进行了进一步的分离纯化。冷水易溶板蓝根多糖RIPⅢ进行脱蛋白时,采用闪式提取进行改良后较之传统Sevage法在脱蛋白的效率上有很明显的提高。 板蓝根粗多糖RIPⅢ上DEAE层析柱,分别以不同浓度的盐进行洗脱后分别得到RIP A、RIP B、RIP C、RIP D、RIP E及RIP F六个组分。各个组分以中空纤维膜进行超滤除去小分子物质后分别以凝胶G100进行了分离纯化。 多糖的分子量测定是研究多糖性质的一项重要的工作,本研究首次以HPGFC-ELSD对板蓝多糖组分分子量的测定,即采用高效凝胶OHpad柱进行多糖组分的分析,以蒸发光散射检测器(ELSD)进行组分的分子量测定。 将标准分子量多糖及分离纯化后板蓝根多糖各组分分别进样高效凝胶柱检测分子量;测定条件为OHpad柱(G2000SW,7.5mm×300mm);水为流动相,流速1.0mL/min ,温度25℃;测得标准分子量多糖的线性关系为lgMw=-0.5788RT+8.53572, r=-0.9969,Mr线性范围5900～404000。 多糖组分样品进行检测表明:RIP A1含有分子量为314889的多糖成分;RIP A2含有分子量为222970、215664和165203的多糖成分;RIP B1含有分子量为566771、512859和311134的多糖成分;RIP C1含有分子量为252057、220606、336251和55682的多糖成分;RIPD1含有分子量为252057、220606、336251和55682的多糖成分;RIPE1含有分子量为272312的多糖成分;RIPF1含有分子量为321676的多糖成分。