《金匮要略》"见肝之病,知肝传脾,当先实脾"主要是指肝之病最易传至到脾,而维持脾气充盈则使之不易受外邪侵入。其是张仲景治未病理论的具体体现,也是中医药治疗肝病的重要治法,肝病实脾法广泛应用于临床防治肝病。本实验通过观察各组大鼠的宏观表征、体重增长情况,检测尿D-木糖排泄率、血清中胃肠激素和肝功能生化以及血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)的含量,进一步探究了 "见肝之病,知肝传脾,当先实脾"的客观证据。目的:探讨"见肝之病,知肝传脾,当先实脾"的客观证据,为诠释《金匮要略》"见肝之病,知肝传脾,当先实脾"治未病理论提供科学依据,并为丰富与发展中医药防治慢性肝病的治则治法进行有益的科学探索。方法:1.采用慢性束缚的方法复制肝郁证大鼠模型,并将SD大鼠分为7组,即正常对照组、模型组、四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组(前14天给四逆散,后14天给柴芍六君子汤)、柴芍六君子汤丙组(前14天给六君子汤,后14天给柴芍六君子汤)。2.按试剂盒比色法测定大鼠尿液离心后上清液中D-木糖浓度,并算出尿D-木糖排泄率。3.按照常规HE染色法进行光镜观察各组大鼠的肝脏组织、胃黏膜组织以及十二指肠组织的病理组织变化。4.采用酶联免疫试剂盒检测血清中的胃肠激素,即胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、生长抑素(SS)、胆囊收缩素(CCK)的含量。5.使用全自动生化分析仪,对血清中天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的含量进行测定。6.采用酶联免疫试剂盒检测血浆中促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)的含量。结果:1.肝郁证大鼠模型造模4周完成后,正常对照组大鼠的状态一直保持正常;模型组大鼠出现典型肝郁症状,例如情绪暴躁转为低落,皮毛光泽度下降且易掉毛,便溏等;各给药组干预的大鼠较为正常,少数有情绪暴躁的情况。模型组与正常对照组比较,其大鼠体重增长量下降,差异有统计学意义(P<0.05);四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组与模型组比较,各给药组大鼠的体重增长量均上升,差异有统计学意义(P<0.05);其中柴芍六君子汤丙组大鼠的体重增长量最大。2.尿D-木糖排泄率检测结果:模型组与正常对照组相比较,其尿D-木糖排泄率下降,其差异有统计学意义(P<0.05);四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组与模型组比较,其尿D-木糖排泄率呈上升趋势,差异均有统计学意义(P<0.05);四逆散组、柴芍六君子汤甲组与六君子汤组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组相比较两两均具有均有统计学差异(P<0.05)。其中柴芍六君子汤丙组大鼠的尿D-木糖排泄率最高。3.胃肠激素检测结果:模型组与正常对照组相比较,血清中GAS、MTL、CCK的含量水平均下降,SS的含量上高,差异有统计学意义(P<0.05);四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组与模型组相比较,GAS、MTL、CCK含量上升,SS含量下降;其中六君子汤组大鼠的GAS、MTL、CCK含量最高,SS含量最低。4.肝功能生化指标检测结果:模型组与正常对照组相比较,血清中天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBILI)的含量均上升,差异有统计学意义(P<0.05);四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组与模型组相比较,AST、ALT、TBIL的含量均下降,其中柴芍六君子汤丙组大鼠的AST、ALT、TBIL的含量最低;与正常对照组比较,模型组大鼠TP、ALB、DBIL的含量变化无统计学差异(P>0.05)。5.对促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)测定:模型组与正常对照组相比较,血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)含量均上升,差异具有统计学意义(P<0.05);四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组与模型组相比较,ACTH、CORT的含量下降,其中柴芍六君子汤丙组大鼠血浆ACTH、CORT含量最低。6.病理形态观察结果:正常对照组、模型组、四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组大鼠的肝、胃、十二指肠的病理形态均为正常状态。结论:①肝郁证模型大鼠的肝功能生化指标与正常大鼠相比较,AST、ALT、TBIL指标明显上升,结果表明该模型大鼠的肝功能损伤。②肝郁证模型大鼠的胃肠激素指标与正常大鼠相比较,GAS、MTL、CCK指标下降、SS指标上升,表明该模型大鼠的胃肠消化功能出现紊乱。③肝郁证模型大鼠出现肝功能生化指标异常的同时,其胃肠激素指标也会随着发生相应的变化,提示肝功能出现损伤的同时,胃肠运动功能也会受到相应的影响。④模型组及给药组大鼠的肝、胃黏膜及十二指肠的病理形态变化未见明显异常,说明该模型只造成了功能性异常,还未导致器质性损伤。⑤对于肝郁证的治疗,四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组五组给药组对胃肠激素均有不同程度的改善效果。其中着重实脾的六君子汤组、柴芍六君子汤丙组改善效果最为显著。四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组对AST、ALT、TBIL有一定的改善作用,其中着重先实脾的六君子汤组、柴芍六君子汤丙组改善效果最为显著。⑥对HPA轴进行检测时,四逆散组、六君子汤组、柴芍六君子汤甲组、柴芍六君子汤乙组、柴芍六君子汤丙组各给药组对血浆ACTH、CORT的含量均有不同程度的改善,其中先着重实脾后进行疏肝健脾的柴芍六君子汤丙组的作用效果最为显著。以上结果证明先着重实脾后进行疏肝健脾的给药组对于肝郁大鼠的治疗效果最为明显,说明以上实验结果可以作为验证"见肝之病,知肝传脾,当先实脾"的客观证据。
