甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑和肾上腺组织的蛋白质组学分析

目的：建立甲亢肝阳上亢证大鼠与正常大鼠的下丘脑和肾上腺双向凝胶电泳图谱，寻找差异表达的蛋白质点，探讨其功能和作用，以期揭示甲亢肝阳上亢证的本质。 方法：（1）将20只SD大鼠随机分为正常组和模型组各10只，正常组不做任何处理，每天进行正常饮食。模型组用加灌附子汤和左甲状腺素钠（L-T4）的方法，造成甲亢肝阳上亢证大鼠模型。所有大鼠于第22天处死。以一般情况和T3、T4作为判断动物模型是否复制成功的指标。 （2）将正常组与模型组大鼠下丘脑和肾上腺组织进行双向凝胶电泳，图像处理找出差异蛋白，并利用质谱和生物信息学技术对其进行鉴定和分析。 结果：（1）两组大鼠的一般情况和T3、T4值有显著差异，由此判断动物模型复制成功。 （2）通过PDQuest7.0分析软件进行点检测，获得两组组大鼠的蛋白质点数，下丘脑组织正常组（764±30）个，模型组（755±28）个。肾上腺组织正常组（690±33）个，模型组（715±25）个。模型组与正常组比较分析，下丘脑组织模型组中蛋白质点表达上调的点有18个，下调的点有24个；肾上腺组织模型组中蛋白质点表达上调的点有32个，下调的点有6个。然后通过质谱技术和蛋白质数据库比较，对其中的部分差异蛋白点进行鉴定。结果显示，下丘脑模型组较正常组上调的有硫氧还蛋白、NSFL1辅助因子；下调的有泛素羧基末端水解酶同工酶L1、血小板活化因子乙酰基水解酶IB-r亚单位、谷氨酸脱氢酶前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2和微管蛋白B-5。肾上腺组织模型组中上调的部分蛋白质为GrpE蛋白同系物1、热休克蛋白60kDa、钙网织蛋白前体、脂酰辅酶A脱氢酶、异戊酰辅酶A脱氢酶和乙醛脱氢酶。 结论：1、通过双向凝胶电泳技术初步建立了甲亢肝阳上亢证大鼠及正常大鼠下丘脑和肾上腺组织蛋白质组表达图谱。 2、通过凝胶图像分析，模型组与正常组大鼠下丘脑和肾上腺组织2—DE图谱的表达具有差异性。 3、通过质谱技术和蛋白质数据库比较鉴定出13种差异表达蛋白质。初步认为这些差异蛋白质可能通过氧化还原反应、蛋白质降解通路、细胞分裂及信号传导等参与甲亢肝阳上亢证的形成，但具体机制还需进一步深入研究。同时这亦为探索甲亢肝阳上亢证的诊断和治疗提供了新的思路。