电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的：观察电针对大鼠颈椎病模型椎间盘细胞凋亡及Wnt/p-catenin信号通路的影响。方法：选择SPF级SD大鼠(100g±20g)40只,雌雄各半,先让大鼠适应环境1周,然后将大鼠按随机数字表法分为假手术组1 0只,造模组30只。假手术组仅将皮肤切开,不切断肌肉组织,然后缝合,作为对照；造模组采用动静力失衡的方法建造大鼠颈椎病模型。造模后常规饲养3个月,采用甲苯胺蓝染色法观察颈椎间盘组织形态学的改变确定造模成功。将造模组大鼠用随机数字表分为模型对照组(模型组)、模型电针治疗组(电针组)、模型莫比可片对照治疗组(莫比可组),每组8只。电针组将大鼠固定于自制大鼠固定器上,针刺“大椎”穴约4mm,在大鼠右耳后取一非经非穴点,连接韩氏穴位神经刺激仪,刺激参数为：疏密波,频率2/100Hz,疏波密波交替,各工作3s,频率2Hz时脉冲波的波宽为0.6ms,频率100Hz时脉冲波的波宽为0.2ms,强度以针刺部位轻轻抖动为宜,电流强度约1-2mA。每日治疗1次,连续治疗14天为1疗程,疗程之间间隔2天,共2个疗程；莫比可组给予莫比可片灌胃治疗,1次／d,灌胃剂量按照《动物实验方法学》人与大鼠体表面积的药物等效剂量换算,每日0.7878 mg/kg灌胃干预,治疗疗程与电针组相同；假手术组和模型组只做固定而不做治疗处理,其固定的时间同电针组。治疗结束后取椎间盘,采用DNA断裂的原位末端标记法(Termi-nal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,Tunel)检测椎间盘细胞凋亡情况,采用免疫组织化学法检测椎间盘细胞Wnt、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthese kinase-3p,GSK-3β)、轴蛋白(Axis Inhibition Protein,Axin)的表达,采用Western blot半定量检测法检测椎间盘组织β-catenin蛋白的表达水平。结果：(1)Tunel法：与假手术组比较,光镜下观察造模组凋亡细胞的阳性表达数目明显较多,呈棕色或棕褐色,体积较小,形态呈浓缩或碎点状,不规则,大小不一致。与模型组比较,电针组、莫比可组的凋亡细胞阳性表达数目明显减少。(2)甲苯胺蓝染色：假手术组中软骨终板呈现深蓝紫色,且终板厚度较厚,软骨细胞数目多,造模组中软骨终板染色较淡,其软骨终板的厚度较薄,且软骨细胞数目少。(3)免疫组织化学检测：与假手术组比较,造模组中Wnt、GSK-3β、Axin的阳性表达量相对减少,差异均有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较,电针组、莫比可组Wnt、 GSK-3β、Axin蛋白的表达量相对增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)Western-blot检测：与假手术组比较,造模组的β-catenin阳性表达量相对减少,差异具有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较,电针组、莫比可组中β-catenin的阳性表达量相对增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：(1)电针能够有效的抑制大鼠颈椎病动物模型椎间盘细胞的凋亡。(2)电针能促进Wnt/p-catenin信号通路中Wnt、GSK-3p、Axin、β-catenin蛋白的表达,调控Wnt/β-catenin信号通路。(3)电针“大椎”穴可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路,提高椎间盘细胞中Wnt、GSK-3β、Axin、β-catenin蛋白的表达,达到延缓椎间盘退变的目的。