食药两用栀子果的差异化质量评价及主要功效成分的分离纯化

栀子果属卫生部颁布的首批药食两用资源，含有多种重要生物活性成分，包括以栀子苷（京尼平苷）为主的环烯醚萜苷类和以西红花苷为主的类胡萝卜素类，具有极高的食用和药用价值及广泛的应用前景。本试验利用色谱-质谱指纹图谱技术及相似度计算和Z-score综合评价法研究不同来源栀子果各有效部位的主要功效成分与栀子食/药两用特性之间关系，首次建立不同类别栀子果原料的差异化质量评价体系；并以湖北孝感水栀子为例，通过响应面回归实验探讨高效萃取栀子主要功效成分的提取工艺参数及萃取剂，以及两步吸附树脂法规模化制备中等纯度的栀子西红花苷和栀子苷的分离纯化工艺，得到以下结论： （1）采用UPLC-DAD技术建立不同产地栀子果及有效部位（栀子果仁、果壳）的主要活性成分（栀子环烯醚萜苷和西红花苷）指纹图谱，通过指纹图谱相似度计算对不同产地栀子果功效成分的指纹图谱进行相似度评价。结果表明，不同产地栀子果环烯醚萜苷和西红花苷的种类和主要成分（栀子环烯醚萜苷I-V；栀子西红花苷I-IV）基本相同，相似度高（相似度均大于0.95）。 进一步分析不同产地栀子果各有效部位分别在440nm和238nm的指纹图谱表明，栀子果仁和果壳中栀子环烯醚萜苷类物质的种类和含量存在显著差异，是栀子药用亲缘属性评价的关键因素。栀子果仁主要含环烯醚萜苷III和V，栀子果壳主要含环烯醚萜苷I和V。通过对不同产地来源栀子的果仁和果壳中环烯醚萜苷色谱峰的差异分析，表明广西鹿寨和江西抚州栀子是一类具有紧密亲缘关系的栀子种类；湖北孝感、湖北长阳、安徽亳州和浙江安吉栀子是另一栀子种类；河南唐河栀子为一单独栀子类。 （2）对7个产地栀子果实及不同部位（果仁、果壳）的有效成分（栀子苷、西红花苷总苷、总黄酮和油脂）含量进行测定。结果表明，不同产地栀子果的环烯醚萜苷和西红花苷的种类及主要成分基本相同，但含量不同，以果仁中含量分布最高，其次果壳。 湖北长阳和广西鹿寨产栀子是提取药物中间体栀子苷的最适资源，湖北孝感和湖北长阳产栀子是提取天然色素西红花苷的最适资源。湖北长阳产栀子中栀子苷和西红花苷总苷含量均为最高。 江西抚州产栀子总黄酮含量相对于其它产地含量明显偏高，为植物类黄酮的合适资源；安徽毫州产栀子果油含量最高，为功能性油脂的最适资源。栀子总黄酮在果壳中含量最高，果仁次之；栀子果油主要集中于果仁中。 根据多指标归一化处理综合评价结果，湖北长阳产栀子品质优异，各种有效成分相对含量均较高。 （3）通过单因素和响应面回归试验探讨提取栀子主要功效成分的提取工艺参数及萃取剂。以栀子西红花苷的提取率为评价指标，最佳提取条件为温度41.39℃，提取时间0.75h，乙醇浓度53.76%，预测西红花苷提取率最优值为89.46%（相同条件下栀子苷的提取率为85.12%）。MES对西红花苷的增溶效果具有显著影响，使其提取率增加5%。 （4）考察12种大孔树脂对栀子苷和西红花苷的静态和动态吸附解吸性能，并采用吸附动力学模型和颗粒内扩散模型对栀子苷吸附过程进行预测性拟合。筛选树脂HP-20为一步树脂分离西红花苷和栀子苷，分离条件为60%～80%乙醇洗脱得到西红花苷（纯度≥80%、E1% 1cm380、OD≤0.4）；20%～25%乙醇洗脱得到栀子苷（纯度33.3%）。X-5大孔树脂作为二步树脂进一步纯化栀子苷，精制条件为pH5.5、20%乙醇洗脱，得到纯度为65%的栀子苷。