寡聚脱氧核苷酸对小鼠急性酒精性肝损伤的影响

酒精性肝病已经成为我国第二大肝病。有研究表明，酒精导致的肝损伤与天然免疫的激活及炎性细胞因子的产生有关。目前认为，Toll样受体（Toll-likereceptor, TLR）4与酒精性肝损伤关系密切，我们考虑，既然TLR4与其配体的相互作用在酒精性肝损伤中发挥着重要作用，那么其它TLR与其配体的作用是否也会影响酒精性肝损伤呢？而且，酒精会导致肝细胞的凋亡或坏死，那么肝细胞释放出来的DNA是否会通过与肝脏内细胞的TLR9结合从而影响酒精性肝损伤呢？酒精可致肠粘膜渗透性增加，肠道内的细菌DNA是否也会进入肝脏并通过TLR9对肝损伤有影响呢？基于以上考虑及本课题组在免疫调节方面积累的大量工作基础，我们通过给灌酒小鼠腹腔注射TLR9的配体——人工合成的含CpG基序的单链脱氧寡核苷酸（CpG ODN），来研究肝脏内TLR9与其配体的相互作用对酒精性肝损伤的影响。我们选用雄性ICR小鼠作为研究对象，通过给小鼠按7g/kg50%乙醇溶液灌胃的方法制造急性酒精性肝损伤模型，以血清中谷丙转氨酶（ALT）水平及肝脏病理变化作为衡量肝损伤的指标。我们首先选择了本科室自行研制的一种C型CpG ODN—YW002作为研究对象，研究发现，在灌酒的同时及灌酒后给予YW002均对小鼠的血清中ALT水平没有影响。之后，在继续研究YW002的同时，也对2216（A型CpG ODN）和200（6B型CpG ODN）对酒精性肝损伤的影响进行了研究。结果显示，2216和2006均可加重酒精性肝损伤，其中2216的作用更明显，而YW002可以一定程度的减轻灌酒小鼠肝脏的病理改变。在对A型CpG ODN加重酒精性肝损伤的可能机制进行研究时，我们发现2216可增加灌酒小鼠肝脏内TLR9及TNF-α的表达，而YW002可增加小鼠肝脏内IFN-α的表达。我们推测这可能就是这两种类型CpG ODN分别具有加重或减轻酒精性肝损伤的原因。在体外实验中，我们发现：2216可增加肝癌细胞系Hep G2细胞线粒体膜的通透性，这可能也与其能够加重酒精性肝损伤有关。 随后我们又对另一种类型的ODN—抑制性ODN对酒精性肝损伤的影响进行了初步研究，我们所选用的ODN均为本科室自行研制。研究发现，灌酒同时给予抑制性ODN—MT01及免疫惰性ODN—MS19均可加重小鼠的急性酒精性肝损伤；灌酒前给予MT01也可加重小鼠的酒精性肝损伤，其作用具有剂量依赖性；但灌酒后给予抑制性ODN不但没有表现出加重肝损伤的作用，MT01还表现出减轻酒精性肝损伤的作用。 综上，我们的研究表明，不同类型的CpG ODN通过对TLR9激活程度的不同在酒精性肝损伤中发挥不同的作用，A型和B型CpG ODN在灌酒后给予可加重小鼠的酒精性肝损伤，而C型CpG ODN对酒精性肝损伤表现出一定的保护作用。抑制性ODN在饮酒后应用具有减轻酒精性肝损伤的潜能，有望在酒精性肝损伤的预防及治疗中发挥重要的作用。