化湿液对湿阻证大鼠胃肠相关蛋白表达的影响

背景 湿邪是自然界中具有重浊、粘滞、趋下等特性的外邪。而湿邪阻滞中焦脾胃，致脾失健运，表现出胸脘痞闷不舒，全身困重乏力，纳食乏味呆滞，腹胀泄泻水肿，舌苔厚腻脉濡等病症，就是湿阻证。随着生活及工作节奏的加快，生活中诸多不良生活习惯的形成，使湿邪致病呈现广泛并有扩大的趋势。饥饱无常、生冷饮食以及肥甘厚味等食物均易损伤脾胃阳气，易致湿邪困阻。另外，情志不遂必招致肝气郁结，气机不畅，木不疏土也是常见致湿的原因。只要湿邪阻滞中焦脾胃，皆可导致湿阻证的发生，而临床常见的胃肠道疾病、肝胆疾病、病毒性感冒、高血压、糖尿病等病症，其发病机理有时皆与水、湿、痰饮的形成有一定关系，有的还表现出湿阻证这一基本病机。可是，目前西医治疗湿邪所致的疾病，疗效一般不佳，因此，从中医角度研究湿阻证，对于治疗由湿邪引起的相关疾病具有十分重要的临床价值。 目的 本课题旨在研究化湿液对湿阻证大鼠胃肠消化吸收功能、胃肠屏障功能及水液代谢调节功能等方面的影响，并综合前期实验结果，为开发一个有效、安全的化湿中医药方提供实验依据。同时还可为湿阻证的进一步研究提供一定思路。本实验主要从基因及蛋白质水平入手资助渠道：重庆市卫生局科技项目（2009-2-114）进行研究，以期为后续的细胞信号转导及蛋白组学等研究提供前期实验基础。 方法 40只清洁级SD大鼠先进行1周的适应性喂养，然后按每组8只随机进行分组（正常组、模型对照组及化湿液低、中、高剂量组）。正常组大鼠常规喂养，其余各组采用改进的环境+疲劳法进行造模共6天。造模成功后，正常组及模型对照组大鼠予常温下的生理盐水灌胃，化湿液各治疗组按低、中、高剂量(4g/kg、8g/kg、16g/kg)灌胃治疗，1次/天共8天。用比色法测定血清中D-木糖含量、ELISA方法测定血清Ghrelin含量、免疫组化（SP）法测定结肠AQP4及胃黏膜EGFR等蛋白的表达情况并用实时荧光定量（Real-Time PCR）的方法检测结肠黏膜AQP4mRNA及回肠黏膜ZO-1mRNA的表达水平。 结果 对胃肠消化吸收功能的影响：正常组相比，模型组大鼠食少、便溏等脾虚症状明显，胃肠黏膜有明显充血水肿，且有出血点及凝血块。模型组大鼠血清D-木糖（P<0.01）和Ghrelin（P<0.05）含量明显降低；与模型组比较，化湿液低、中、高剂量组对大鼠脾虚症状及胃黏膜充血、水肿症状改善明显，部分大鼠脾虚症状完全消失，胃黏膜亦基本恢复正常，血清D-木糖（P<0.05）及Ghrelin（P<0.01）含量均有不同程度升高。提示化湿液对脾虚湿阻证大鼠消化吸收功能的改善与提高血清D-木糖与Ghrelin含量有关。 对水液代谢的影响：与正常组相比，模型组大鼠结肠黏膜AQP4表达减少（免疫组化P<0.01，RT-PCR P<0.05），运用化湿液低、中、高剂量治疗后，各治疗组大鼠结肠黏膜AQP4表达均依次增加（免疫组化P<0.01，RT-PCR P<0.05）。提示化湿液改善脾虚湿阻证大鼠腹泻等症状与提高结肠AQP4表达有关。 对肠道防御功能的影响：与正常组相比，模型组大鼠回肠黏膜ZO-1mRNA表达减少（P<0.05），化湿液低、中、高剂量组表达均依次增加（P<0.05）。提示化湿液对肠上皮屏障的保护作用主要通过提高肠道ZO-1mRNA而实现。 对胃黏膜损伤的修复作用：免疫组化结果显示模型组大鼠胃黏膜EGFR表达较正常组明显减少（P<0.05），而运用化湿液低、中、高剂量治疗后EGFR表达依次增加（P<0.05）。提示化湿液对湿阻证所致胃黏膜损伤的修复作用主要通过提高胃黏膜EGFR表达来实现。 结论 化湿液对湿阻证造成的胃肠消化吸收功能障碍、胃肠屏障受损及水液代谢失调有明显治疗作用，其机制可能与调节相关胃肠激素分泌，改变相关功能蛋白质的表达有关。