乳香药效物质基于“解毒、生肌”的胃保护及促愈合作用及机制研究

背景:中药药效物质的探索与其机制的探讨是近年来中药现代化发展的方向。传统中药乳香功效为活血、行气、生肌、解毒、消肿、止痛,具有优秀的抗炎效果,可用于治疗骨关节炎、风湿性关节炎等、相比较NSAIDs,安全性更好,且有文献报道其除了有良好的抗炎镇痛效果外,还具有抗胃溃疡作用和促伤口愈合效果,但其药效物质及作用机制却未见报道。胃溃疡常伴有慢性的周期性的上腹疼痛,中医也称“胃脘痛”,治疗胃脘痛以疏肝、理气为主。胃溃疡损伤的典型特征包含了大量自由基和炎症因子的释放等,这些均可认为是中医所提到的“毒邪”,“毒”的存在继而加重了胃溃疡损伤、延缓了伤口愈合阻碍了“生肌”,乳香归肝、脾经,《本草汇言》中指出的,乳香可入疡科,可“解毒、生肌、行气、止痛”用于治疗脘腹疼痛。我们实验室前期实验发现乳香可以调节Nrf2/HO-1从而发挥“解毒”清除自由基的脑保护功效,此外还可以通过调节NO和e NOS保护血管内皮改善血液流变学从而发挥“活血”“行气”功效。如若乳香胃保护及促愈合的“解毒”“生肌”药效物质及机制得以阐明,则其有望成为兼具胃保护和心脑血管保护功效的良好抗炎药物,有望成为NSAIDs不能耐受患者的替代药物。同时,有望成为兼具胃黏膜保护和促愈合效果双重功效的胃保护药物。目的:基于乳香“解毒”(清除体内自由基、炎症因子、细胞因子)、“生肌”(促伤口愈合、血管新生)效果探索其胃保护主要药效物质及作用机制。方法:(1)通过选取乙醇造模(直接刺激)、吲哚美辛造模(NSAIDs诱导)、束缚冷刺激造模(精神压力)三种不同造模方式,筛选乳香主要药效物质乳香酸中不同单体α-BA、β-BA、AKBA、KBA胃保护及抗炎功效,初步筛选最佳药效物质;(2)检测Ph、GWM、PGE-2、MDA、SOD、CAT以及NO含量。通过免疫组化检测Nrf2/HO-1表达以及western blot法检测HO-1表达。将筛选出的单体物质通过乙醇诱导SD大鼠胃溃疡模型进一步验证并探讨其通过抗氧化应激损伤调节Nrf2/HO-1通路发挥“解毒”功效的机制;(3)利用动物实验、免疫荧光染色、western blot、wound healing、transwell、tube formation等实验验证并尝试解释筛选出的单体物质通过VEGF/MMP-2调节血管新生及促进伤口愈合的“生肌”功效机制。结果:(1)证实前人结果BAs有较好的抗炎效果和胃保护效果;筛选出BAs的单体成分中α-BA可能是BAs胃保护效果方面的主要药效物质;(2)进一步证实α-BA胃保护效果,发现α-BA可通过改善氧化应激损伤、提高PGE-2、NO含量、调节Nrf2/HO-1发挥抗氧化的胃保护功效;(3)α-BA可以通过调节VEGF、MMP-2、TGF-β、TIMP2等促进血管新生、抑制胶原蛋白分解、促进细胞迁移从而达到胃保护促愈合效果。结论:我们通过多种模型和实验技术证实了α-BA作为乳香“解毒”“生肌”的主要药效物质,可以减轻胃黏膜受到的氧化应激损伤的侵害,同时可以促进溃疡伤口愈合和血管新生,减轻粘膜下血管损伤和胶原分解从而发挥胃保护及促愈合作用。其中Nrf2/HO-1通路以及VEGF/MMP-2调节的各个信号分子与其“解毒”“生肌”功效密切相关。