利用组织培养诱导罗汉果同源四倍体

本试验以目前栽培最广泛的青皮果品种的无菌实生苗和试管苗为材料，采用组织培养和秋水仙素诱变相结合的方法诱导罗汉果同源四倍体。 结果表明，秋水仙素诱导罗汉果四倍体的直接效果是形成嵌合体。诱导材料通过顶芽切割和丛生芽技术诱导再生苗，可分离获得同源四倍体植株(2n=4x=56)。在整体植株水平上的诱导中，分别用0.1%、0.2%、0.4%秋水仙素溶液点滴无菌实生苗的生长点，每天1滴，连续处理4天，浓度为0.1%时处理无效，0.2%-0.4%为有效浓度，诱导效果较好，诱变率分别为55%和75%。在秋水仙素溶液中添加0.3%琼脂，配制成半固体状的琼脂制剂再作同样处理，有促进诱导的作用。0.1%-0.4%均为有效浓度，用0.1%秋水仙素琼脂制剂处理实生苗生长点4次，诱变率达60%；0.2%处理4次或0.4%处理2次，诱导效果较好，诱变率分别为80%和90%。 在茎尖离体诱导中，离体茎尖经预培养3天后分用含有100mg/L、300mg/L、500mg/L秋水仙素的液体培养基振荡处理3、5、7、10天，再切取顶端5mm培养，诱导再生植株。结果表明，实生苗离体茎尖分别用100mg/L处理10天、300mg/L处理7天、500mg/L处理3天或5天，诱导效果较好，诱变率为80%-100%。试管苗茎尖处理后直接接入芽诱导培养基中培养，易产生回复突变，难以获得四倍体植株。但处理后通过切取较小的微茎尖诱导丛生芽，成苗后剪除二倍体枝条，促使变异芽的生长，可明显提高诱变率。试验结果表明，茎尖用300mg/L处理10天、500mg/L处理7天或10天后，再切取长0.5-1.2mm的微茎尖诱导丛生芽，效果较好，诱变率分别为60%、66.7%和73.3%。 在嵌合体的纯化和稳定中，接种在MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.1mg/L的分化培养基中的叶组织，可分化形成大量不定芽，不定芽的分化频率达100%。成苗后经鉴定可分离得到同质多倍体，多次继代无分离现象发生。 将罗汉果同源四倍体切段，接种在6-BA 0.3-0.5mg/L+NAA0.02mg/L的培养基中继代培养，增殖效果好，增殖系数约为3.0/月。 罗汉果同源四倍体试管苗的枝条粗壮，叶片增厚、变宽，叶基闭合，叶色深绿；叶片表皮毛变粗、变长，清晰可见；气孔增大，气孔密度比二倍体小，气孔保卫细胞增长，保卫细胞内叶绿体粒数增多。试管苗的形态特征可作为罗汉果多倍体形态学鉴定的可靠指标。 本文还对同源四倍体植株的形态特征和生育特性进行了初步研究，为罗汉果同源四倍体的利用提供了理论依据。田间观察发现，罗汉果同源四倍体植株与二倍体相比，部分器官表现出巨大性：新梢粗壮；叶柄增粗，叶基闭合，叶片变宽、变厚，叶形指数变小，叶面粗糙，叶色深绿，幼叶上的表皮毛浓密；花蕾大，花色深，花瓣和子房明显大于二倍体。但四倍体植株生长缓慢，生长势比对照二倍体弱，上棚时间晚，分枝数少；生育期延迟1-2个月，育性下降，部分雄花出现无花粉败育现象，雌株结实率下降，果实变小、变短，果形指数变小，果皮增厚，不易开裂，种子数量减少。