波棱瓜子抗肝损伤有效部位化学成分及其活性研究

波棱瓜子系葫芦科植物波棱瓜Herpetospermum caudigerum Wall.的干燥成熟种子,是一种常用藏药,已被《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药(第一册)收载。波棱瓜子味苦,性寒,能清腑热,胆热,具有清热解毒、去火降热、助消化作用,用于治疗肝热、黄疸型传染型肝炎等。 目前,对波棱瓜子的研究较少。国内袁海龙等从波棱瓜子中分离得波棱素,张梅等从波棱瓜子中分离得波棱酮,去氢双松柏醇。国外Kaouadji Mourad等人研究报道其中含有苯呋喃类化合物:波棱醛(Herpetal),波棱醇(Herpetoriol);木脂素类化合物:木脂素二聚物(Herpetol),木脂素三聚物(Herpetrione),木脂素四聚物(Herpetetradione,Herpetetrone),木脂素五聚物(Herpepentol)等。 我们对波棱瓜子的前期药效学研究表明,波棱瓜子的乙酸乙酯提取物具有较强的抗肝损伤活性。因此,为进一步确定其活性成分,本课题对该部位化学成分进行了研究。采用反复常压硅胶柱层析及高效液相制备色谱进行分离纯化,我们从波棱瓜子的乙酸乙酯提取物中分离得到了六个单体化合物。根据化合物的理化性质和光谱数据进行结构鉴定,确定其为波棱内酯Ⅰ(Ⅰ)、波棱内酯Ⅱ(Ⅱ)、波棱酮(Ⅲ),去氢双松柏醇(Ⅳ)、2,4—二羟基—嘧啶(Ⅴ)、豆甾醇(Ⅵ)。其中化合物Ⅰ、Ⅱ为新化合物,且为少见的香豆素类型。化合物(Ⅴ)为首次从该属植物中得到。 将本实验室分得的化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ进行体外试验研究。通过肝细胞体外培养的方法,验证受试药物对二甲基亚砜(DMSO)引起的肝细胞损伤的保护作用。试验结果:空白对照组和DMSO造成细胞损伤组、Ⅰ药物组、Ⅳ药物组的OD值有极显著差异,p＜0.01,和Ⅲ药物组无显著性差异;Ⅲ药物组OD值与造模空白组有显著性差异,p＜0.01。结果表明DMSO可以造成肝实质细胞损伤,细胞存活率和空白对照组有极显著的差异;而Ⅲ受试药物对DMSO所造成的损伤有细胞保护作用,细胞存活率和造模空白组有显著性差异。 本课题研究结果为最终揭示波棱瓜子治疗肝病作用物质基础,进一步扩大波棱瓜子临床应用范围和新药研究奠定了一定的基础。