当归多糖的分离纯化与免疫调节作用及其机理研究

目的：多糖作为一类重要的生物反应调节剂，在抗肿瘤、抗衰老和免疫调节等方面具有良好的应用前景。研究证明，当归多糖具有抗辐射、抗肿瘤、促进造血等作用。然而，当归多糖的免疫调节作用及其机理尚有待阐明，本研究采用甘肃岷县当归[Angelica sinensis （Oliv.） Diels]，分离纯化当归多糖，对此进行研究。 方法：（1）新鲜当归，清洗、机械捣碎、乙醇回流萃取总挥发油成分；残渣经水煮、醇沉提取当归多糖；经透析、除蛋白、冷冻干燥得到白色粉末状当归总多糖（AP-0）；再经常压凝胶过滤柱层析分离得到不同当归多糖组分。（2）采用改良苯酚-硫酸法测定总糖含量，间羟基联苯法测定糖醛酸含量，Serva Blue-G染料结合法测定蛋白质含量，HPLC法测定重均分子量，当归多糖组分经三氟乙酸完全水解后应用纸色谱分析单糖组成，溴化钾压片测定红外光谱；水溶液测定紫外光谱。（3）小鼠sc环磷酰胺或ig氢化可的松复制免疫抑制模型，ip AP-0，连续7天，碳粒廓清法测定单核巨噬细胞吞噬功能，进行外周血白细胞和股骨髓有核细胞计数，测定胸腺、脾脏重量计算脏体系数；用绵羊红细胞免疫小鼠，比色法测定血清溶血素IgG、IgM含量。（4）MTT法测定当归多糖组分AP-3对小鼠脾淋巴细胞、腹腔MΦ增殖反应以及混合淋巴细胞反应的影响；免疫磁珠法分离T、B淋巴细胞，测定AP-3对T、B细胞增殖的影响；AP-3与小鼠脾细胞共同体外培养72h，流式细胞术观察CD4+细胞比例的变化。（5）体外培养小鼠脾细胞，加入不同浓度的AP-3，酶联免疫法测定上清液中IL-2、IFN-γ含量，定量RT-PCR法测定细胞内IL-2、IFN-γ mRNA的表达变化。 第＠罗臣大亏玛士功兔生学（抢支 一 结果：O）所得 3个当归多糖组分 AP八，AP毛和 APS，水溶性强、 表观性状好。（）AP刀总糖含量67．9％，糖醛酸含量26．7％，蛋白质含量 0．8％；APl总糖82．3％，糖醛酸18．l％，蛋白质0．5％，重均分子量＊3－sl) X旷；AP－2总糖 73．7％，糖醛酸 38．l％，蛋白质 0．3％，重均分子量＊－22) X旷；AP上总糖 68．3％，糖醛酸 37．5％，蛋白质 0．7％，重均分子量0－7) XIO＼ 当归多糖各组分在单糖组成上没有明显差别，主要出o，Ara 和 Glwt组成；红外光谱呈典型的多糖类吸收光谱，在 770血’有 D－葡萄 糖毗哺环的吸收峰，在840cm－’有a－型的C打平伏键吸收峰，提示糖链 构型是 a－D叩哺型葡萄糖；＊)在… 10～100 m沙g剂量范围内，当归多 糖能对抗环磷酚胺或氢化可的松引起的小鼠脾萎缩，能增加正常小鼠脾 脏重量，而对于正常及兔疫抑制小鼠胸腺无明显影响；能显著促进正常 及免疫抑制小鼠碳粒廓清率；能够对抗环磷酚胺或氢化可的松引起的白 细胞数和股骨髓有核细胞数的降低，对正常小鼠白细胞数和股骨髓有核 细胞数无明显影响；不仅对正常小鼠血清溶血素IgG、lgM的生成有较强 的抑制作用，还与环磷酚胺或氢化可的松有一定的协同作用。O)在30～ 300 lgitTll范围内，当归多糖主要组分 AP习能显著促进小鼠脾淋巴细胞。 巨噬细胞、混合淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖反应，而对B细胞增殖则 有一定的抑制作用；显著增加培养的脾细胞中＊＊矿细胞的比例；m当归 多糖组分AP3呈时间、剂量依赖性显著增加培养脾脏淋巴细胞上清液中 IL上的含量及细胞内mRNA的表达，而对IFN－Y，则呈先升高后降低。 结论：＊)当归多糖的主要组分AP上是均一性多糖，重均分子量低， 范围窄，具有潜在药用价值。O)当归总多糖能增强正常小鼠非特异性免 疫功能，能对抗环磷酚胺和氢化可的松引起的免疫抑制，而对体液免疫 功能则有较强的抑制作用；O)当归多糖组分AP上能增强巨噬细胞和T 淋巴细胞的功能，而对B细胞的增殖具有抑制作用；表明当归多糖促进 小鼠非特异性免疫和细胞免疫功能是直接激活巨噬细胞、T淋巴细胞，而 4 筹＠罗庄丈学埔士村惠生官幢伦支 一 其抑制体液免疫则可能与直接抑制B淋巴细胞有关。O当归多糖升高 h七和IFN1可能与其调节机体免疫功能密切相关。