大型真菌的生态多样性及分子鉴定

本研究包括大型真菌的生态多样性调查和菌丝体的分子鉴定两部分，现分述摘要如 下： （一）大型真菌的生态多样性调查 调查了 422 种大型真菌的生境、生态，按生态习性将这 422 种大型真菌分为 12 个 生态类型，即土壤腐生菌、木腐菌、落叶及腐草生菌、粪生菌、植物寄生菌、昆虫寄生 菌、真菌寄生菌、地衣型真菌、外生菌根菌、昆虫共生菌、天麻共生菌和真菌共生菌。 结合 94 幅典型照片对中国大型真菌的生态多样做了初步阐述，并对大型真菌生态多样 性的研究方法进行了讨论。 （二）大型真菌菌丝体的分子鉴定 大型真菌的菌种一般都是菌丝体，而传统的真菌种类鉴定主要是依据子实体的特 征，菌丝体不能直接用于种类鉴定。对于能用人工培养方法生产子实体的种类，可通过 出菇试验对菌种进行种类鉴定，但这种鉴定方法花费的时间较长，往往需要一个月以上 甚至一年的时间。对于尚不能用人工培养方法生产子实体的种类，则不能用这种常规方 法进行菌种鉴定。分子鉴定技术可以对菌丝体进行种类鉴定，但过去文献上报道的大型 真菌分子鉴定多是采用RAPD和ITS-RFLP等方法，这些方法除了精确性与重复性较差外， 还需要以同种真菌的子实体作对照，不同条件下的研究结果缺乏可比性。 本研究是基于 rDNA ITS 区段的 DNA 序列对菌丝体进行物种鉴定，其方法是先扩增 出待鉴定真菌 rDNA ITS 区段的 DNA，并测出其序列，然后与互联网上 DNA 序列数据库 中的信息资源进行比较，从而得出物种鉴定的结论。 运用该方法首先对出菇试验证实了的 3 种栽培食用菌（桃红侧耳、白阿魏侧耳和杏 鲍菇）的菌种进行了物种鉴定，分子鉴定结果与出菇试验的鉴定结果相一致，证明这种 分子鉴定方法是切实可行的，鉴定结果是可靠的。然后进一步用该方法对分离自 6 种外 生菌根菌子实体的菌株进行了分子鉴定，结果表明：分离自松口蘑（Tricholoma matsutake）子实体的 1 个菌株被证实为真正的松口蘑菌种，分离自其它 5 种外生菌根 菌子实体的菌丝体均被证明不是原分离子实体所属物种的菌种。其中分离自褐环乳牛肝 菌[Suillus luteus (L.:Fr.)Gray]子实体的 1 个菌株被证实是裂褶菌（S. commune）， 该分子鉴定结果进一步得到了出菇试验的支持；分离自干巴菌（Telephore ganbajun） 子实体的 1 个菌株被证实为一种镰刀菌（Fusarium sp.），该分子鉴定结果进一步得到 了形态鉴定的支持；分别分离自厚环乳牛肝菌[Suillus grevillei (Klotzsch.)Sing.] 和玫红铆钉菇[G. roseus （Fr.）Karst.] 子实体的 2 个菌株经分子鉴定它们 ITS 区段 的 DNA 序列完全相同，该 DNA 序列与互联网上 DNA 序列数据库中一种内生真菌 （Endophytic fungi ）的相应序列具有高度的同源性 [96.61% （599/620）]，该内生 ii 大型真菌的生态多样性及分子鉴定 真菌分离自我国台湾的珍稀植物南方红豆杉（Taxus mairei），属于一种未鉴定出种类 的担子菌；分离自污白疣柄牛肝菌[Leccinum holopus (Rostk. ) Watl.]子实体的 1 个 菌株的 ITS 区段 DNA 序列与互联网上序列数据库中的所有 DNA 序列同源性均较低，最高 同源性约为 78%，这些同源序列均属于子囊菌。 此外，以茯苓基因组 DNA 为模版，用通用引物 ITS1/ITS4 能扩增出了一条约 1700bp 的特异性 DNA 片段，经 PCR 产物直接测序，测出了 2 条具有茯苓物种特异性的 DNA 序列， 这两方面的 DNA 分子特征可作为茯苓物种鉴定的分子依据。