葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤的防治作用及机理探讨

酒精性肝损伤(Alcoholic liver disease, ALD)是由长期大量饮酒所引起的肝脏损害。本课题的研究目标包括两个方面,一方面是以葛花、枳椇子两药配伍为研究目标,从药效学角度,为中药配伍理论提供现代科学支持；另一方面以酒精性肝损伤为研究内容,进一步扩展葛花枳棋子配伍的临床应用范围,丰富葛花枳椇子配伍防治急慢性酒精性疾病的研究内容。 本课题采用酒精灌胃的方法复制酒精性肝损伤的模型,分别观察了葛花枳椇子及其配伍组采用醇提(其中主要是单味葛花及葛花枳椇子配伍组中的葛花采用醇提)以及葛花枳椇子及其配伍组均采用水提,对酒精性肝损伤大鼠各项指标的影响。在指标检测方面主要是采用组织形态学、生物化学、酶组织学等技术,比较葛花枳椇子配伍、单味葛花、单味枳椇子对酒精性肝损伤的保护作用及机理。 本课题所检测的指标及结果包括以下几个方面 ①葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠肝脏指数的影响 各组药物采用乙醇提取的实验中模型组与空白组相比,肝指数显著增加(p<0.001),各个给药组中2：1组显著高于模型组,其他各个给药组与模型组相比无显著差异；在各组药物采用水提的实验中,模型组与空白组相比,肝指数明显增加,在各个给药组中,葛花组,枳椇子组和1：2组大鼠肝指数明显低于模型组且具有统计学差异,2：1组肝指数明显高于葛花组和枳椇子组,且具有统计学差异。 ②葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALP的影响 在葛花枳椇子及其配伍组采用醇提时,模型组ALT显著高于空白组,各个给药组与模型组相比无统计学差异；模型组AST与空白组相比无统计学差异,各个给药组与模型组相比也无统计学差异；模型组ALP显著高于空白组,各个给药组与模型组相比均低于模型组且具有统计学差异。 葛花枳椇子及其配伍组采用水提时,模型组ALT高于空白组,且具有非常显著的差异,在各个给药组中,葛花组和枳椇子组低于模型组且具有统计学差异,其他各个给药组与模型组相比没有统计学差异；模型组AST显著高于空白组,各个给药组中,除阳性对照药东宝甘泰组外,其他各组与模型组相比均具有统计学差异,但配伍组与单味葛花和单味枳椇子组相比,并未显示出哪组效果相对较好；模型组ALP与空白组相比无统计学差异,各个给药组中除阳性对照药东宝甘泰组外,其他各组与模型组相比均具有降低趋势,且1：2组低于模型组,具有统计学差异。 ③葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠血清TP、Alb、TG的影响 在药物采用醇提的实验中模型组TP与空白组相比有降低趋势,但无统计学差异,各个给药组与模型组相比无统计学差异,其中枳椇子组和葛花枳椇子配伍1：2组与模型组相比有升高趋势,但无统计学差异；模型组A1b与空白组相比无统计学差异,各个给药组中葛花枳椇子配伍1：2组与模型组相比有统计学差异,且1：2组大鼠血清Alb高于葛花组,具有统计学差异,枳椇子组大鼠血清Alb高于1：1组,且具有统计学差异,其他各个给药组与模型组相比无统计学差异。模型组TG显著高于空白组,在各个给药组大鼠血清TG中,阳性对照药东宝甘泰组和单味葛花组低于模型组,且具有统计学差异,其他各给药组与模型组相比无统计学差异,但各个配伍组中葛花枳椇子配伍1：2组和2：1组高于单位葛花组,同时也高于单位枳椇子组,且均具有统计学差异。 在药物采用水提的实验中,模型组TP显著低于空白组,且具有统计学差异,在各个给药组中除阳性对照药东宝甘泰组外其他各给药组大鼠血清中的TP都高于模型组,具有统计学差异,且三个配伍组大鼠血清中的TP都显著高于单味葛花组和单味枳椇子组。模型组大鼠血中A1b明显低于空白组且具有统计学差异,各个给药组与模型组相比无统计学差异。模型组大鼠血清中TG显著高于空白组,各个给药组大鼠血清中TG均显著低于模型组,且具有统计学差异。④葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD、MDA、GSH的影响 在药物采用醇提的实验中,模型组SOD明显低于空白组,具有统计学差异,在各个给药组中东宝甘泰组和单味葛花组大鼠肝组织中SOD活性高于模型组,且均具有统计学意义,其他各给药组与模型组比较均无统计学差异,其中葛花枳椇子配伍1：1组和1：2组大鼠肝组织中SOD的活性显著低于单味葛花组且具有统计学差异。模型组大鼠肝组织中MDA的含量明显高于空白组,在各个给药组中枳椇子组、葛花枳椇子配伍1：2组和2：1组大鼠肝组织中MDA的含量均显著低于模型组,具有统计学差异,且葛花枳椇子配伍1：2组和2：1大鼠肝组织中MDA的含量明显低于单味葛花组(p<0.05),其他各给药组与模型组相比无统计学差异。模型组大鼠肝组织中GSH含量明显低于空白组,且具有统计学差异,各个给药组与模型组相比均具有升高趋势,但无统计学差异。 在药物采用水提的实验中,模型组大鼠肝组织中SOD的活性显著低于空白组,在各个给药组中单味葛花组、葛花枳椇子配伍1：1组和2：1组大鼠肝组织中SOD的活性明显高于模型组,具有统计学差异,其他各给药组大鼠肝组织中SOD的活性与模型组相比有升高趋势,但无统计学差异,其中葛花枳椇子配伍1：1组和2：1组大鼠肝组织中SOD的活性均显著高于单味枳椇子组。模型组大鼠肝组织中MDA的含量显著高于空白组,各个给药组均显著低于模型组,且葛花枳椇子配伍1：2组和2：1组大鼠肝组织中MDA的含量明显高于枳椇子组,且具有统计学差异。模型组大鼠肝组织中GSH的含量显著低于空白组,各个给药组与模型组相比具有升高趋势,但无统计学差异。 ⑤葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠血中乙醇浓度和ADH活性的影响 在药物采用醇提的实验中,各个给药组中,单味枳椇子组,葛花枳椇子配伍1：2组、1：1组和2：1组大鼠血中乙醇浓度都显著低于模型组,且1：1组和2：1组大鼠血中乙醇浓度均显著低于单味葛花组,均具有统计学差异,其余各个给药组与模型组相比有降低趋势但无统计学差异。模型组大鼠肝组织中ADH的活性与空白组相比无统计学差异,且各个给药组与模型组相比也无统计学差异。 在药物采用水提的实验中,各个给药组大鼠血中乙醇浓度较模型组都显著降低,且具有统计学差异,其中葛花枳棋子配伍2：1组大鼠血中乙醇浓度显著低于单味葛花组和单味枳椇子组,而葛花枳椇子配伍1：2组大鼠血中乙醇浓度显著低于葛花组和枳椇子组。模型组大鼠肝组织中ADH的活性显著低于空白组,各个给药组大鼠肝组织中ADH活性都显著高于模型组,且葛花枳椇子配伍2：1组大鼠肝组织中ADH的活性显著高于枳棋子组,而葛花枳棋子配伍1：2组大鼠肝组织中ADH的活性显著高于枳椇子组和葛花组。 ⑥葛花枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理形态影响的实验研究 无论药物采用水提或醇提,对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理形态的影响基本上一致,在单味给药组中葛花的效果相对较好,在各个配伍组中葛花枳椇子配伍2：1组的效果较好,总体上来说在所有给药组中以葛花枳椇子2：1组的效果最好。 ⑦葛花枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织超微结构影响的实验研究 本实验中药物采用醇提,模型组动物肝细胞的细胞核,线粒体,内质网,受到严重的损伤,出现大量的脂肪聚集,和贮脂细胞,而各给药组相应减轻,其中2：1组对肝细胞超微结构的保护作用最强, 从以上所得结果可以总结出以下几点：①从本研究所检测的生化指标综合分析可以看出,无论药物采用水提还是醇提,配伍组对于酒精性肝损伤肝细胞的保护作用总体上较单味给药组效果要好。②从所检测的生化指标及病理形态的结果我们也能看出,药物采用水提的效果优于醇提。③综合分析所检测的生化指标,无论药物是醇提还是水提,在所有的给药组中即东宝甘泰组、单味葛花组、单味枳椇子组、葛花枳椇子配伍1：1组、1：2和1：1组,不能看出哪一组的效果最好。 对于机制探讨,通过实验中所测指标显示出的结果,认为药物发挥疗效的机制可能是提高大鼠肝组织中乙醇脱氢酶的活性,使进入体内的乙醇通过乙醇脱氢酶途径代谢成水和二氧化碳排除体外,从而减少乙醇通过微粒体氧化酶系及过氧化氢酶系代谢产生乙醛及大量自由基,从而达到保护肝细胞,降低大鼠血中乙醇浓度的作用,乙醇浓度降低也会减少脂质过氧化对肝细胞造成的损伤。