低温是限制植物分布与生长的重要环境因素,而且低温冻害是全球农林业普遍存在的自然灾害,给全世界农林业造成了巨大的损失。随着分子生物学技术的发展,寒害研究已经深入到分子水平,从而促进植物抗寒基因工程的发展。
本试验以山葡萄为材料,采用电子克隆技术从山葡萄EST数据库中拼接到两个ICEl基因,应用户RT-PCR扩增得到两个基因编码区全长序列,分别命名为VaICEla和VaICE1b。结果如下：
VaICE1a基因的cDNA全长为1617bp,根据核苷酸推导出的氨基酸序列分析表明它由538个氨基酸组成,命名为VaICE1a。cDNA序列和编码的蛋白序列结果显示其含有一个富s区、核定位信号区(NLS)、转膜区。山葡萄VaICEla基因与欧洲葡萄(XP-002275711)、苹果、毛果杨、欧洲葡萄(XP-002284528)、拟南芥、小麦的同源性分别为99%、61%、62%、64%、60%、76%。该序列在C端高度保守,具有ICE基因典型的BHLH结构域。系统发育分析将VaICE1a基因归入ICEl进化系。三级结构分析表明ValCEla为混合型蛋白。上述结果表明VaICE1a可能为ICEl基因家族的一个新成员。半定量PCR结果表明VaICE1a在山葡萄的不同组织部位均不同程度的表达,在四种非生物逆境胁迫下VaICE1a基因能够诱导表达,与对照组比较表达量没有明显差别。
VaICE1b基因的cDNA全长为1653bp,根据核苷酸推导出的氨基酸序列分析表明它由550个氨基酸组成,命名为VaICElb。山葡萄VaICE1b基因的cDNA序列和编码的蛋白序列结果显示其含有一个富s区、核定位信号区(NLS)、转膜区。通过blast分析发现山葡萄VaICElb基因与欧洲葡萄(XP-002275711)、苹果、毛果杨、欧洲葡萄(XP-002284528)、拟南芥、小麦的同源性分别为64%、68%、68%、99%、、52%、73%。该序列在C端高度保守,具有ICE基因典型的BHLH结构域。系统发育分析将VaICE1b基因归入ICE1进化系。三级结构分析表明VaICE1b的为混合型蛋白。上述结果表明VaICE1b可能为ICEl基因家族的一个新成员。半定量PCR结果表明VaICE1b在山葡萄的不同组织部位均不同程度的表达,在四种非生物逆境胁迫下VaICE1b基因均能够诱导表达,与对照组相比表达量相对较高。
成功构建了VaICEla和VaICElb基因的植物双元表达载体。
