研究目的肠道微生物与结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)的发生、发展关系密切,CRC手术会进一步破坏患者的肠道微生态,这与术后感染、腹泻等多种并发症的发生有关。严重的术后并发症会影响患者的生活质量以及生存期。因此对于CRC术后患者肠道微生态的干预意义重大。临床上采用温阳健脾法治疗CRC术后患者具有较好的临床疗效,能减轻患者术后相关临床症状,提高生活质量,改善患者的预后。研究发现中药制剂具有良好地促进肠道菌群增殖的益生元样作用,同时具有一定的双向调节作用。本研究拟通过比较温阳健脾法治疗CRC术后脾肾阳虚型患者的中医证候变化,以及采用第二代高通量测序技术对治疗前后患者肠道微生物结构进行分类学分析,并与正常健康人群的肠道微生物结构作比较,以期证明温阳健脾法能够调节CRC术后患者的肠道微生态,从而减轻患者术后相关临床症状,提高生活质量,改善患者预后,为中医药抗肿瘤的研究提供新思路、新方法。研究方法本研究采用自身前后对照试验。共纳入7名CRC术后脾肾阳虚型患者,采用温阳健脾方持续治疗2周,通过中医症状积分法对患者治疗前后的脾肾阳虚型相关中医症状总积分进行临床评价,比较患者用药前后中医证候的变化情况。采集治疗前后患者的粪便标本以及10名正常健康人的粪便标本(作为研究基线),采用16S rDNA测序技术检测各样本中的肠道微生物信息,通过Alpha多样性分析、Beta多样性分析、各分类水平上的物种组成分析以及多元统计分析比较治疗前后患者肠道菌群结构的变化,并与正常健康人的肠道菌群结构相比较,从而说明中医证候变化与肠道菌群结构之间的关系。研究结果1.CRC术后患者通过温阳健脾法治疗后脾肾阳虚型相关症状缓解的有效率为100%。治疗前、治疗1周后、治疗2周后的中医症状总积分分别为13.9±1.4、9.4±0.8、5.6±1.0。治疗前和治疗1周后比较、治疗前和治疗2周后比较,治疗1周后和治疗2周后比较,差异均有明显统计学意义(P<0.01)。2.Alpha多样性分析结果显示CRC术后患者肠道微生物群落的丰富度和多样性较正常健康人降低,而在温阳健脾法治疗后肠道微生物群落的丰富度和多样性较治疗前有一定程度的升高,但仍低于正常健康人群。3.Beta多样性分析结果显示CRC术后患者的肠道菌群在结构上与正常健康人有显著差异,处于失调状态;温阳健脾法治疗后患者的肠道菌群结构有所改变,但是变化不明显。4.三组样本的优势菌群在门、纲、目分类水平上没有区别。在科分类水平上,与正常健康组相比,CRC患者组的优势群落中缺失了普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)。5.温阳健脾法治疗前后各患者肠道菌群结构在各分类水平上均发生了改变,其中双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)的相对丰富度都增加,而拟杆菌科(Bacteroidaceae)的相对丰富度都减少。6.不管治疗前后,CRC术后患者肠道菌群结构与正常健康人之间均存在明显差异,且差异有明显统计学意义(P<0.01),其中肠杆菌科(Enterobacteriaceae)为显著差异的微生物群落。温阳健脾法治疗前后患者的肠道菌群结构有变化,但差异无统计学意义。研究结论本研究证实了 CRC术后患者的肠道菌群结构与正常健康人之间存在明显差异。温阳健脾法可以改善术后患者脾肾阳虚相关的中医症状,提高患者生活质量,同时能够改善CRC术后患者的肠道微生态,使肠道微生物群落的丰富程度和多样性增加,并且使益生菌双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)的相对丰富度增加,而条件致病菌拟杆菌科(Bacteroidaceae)的相对丰富度减少,有助于CRC术后患者肠道菌群结构恢复正常健康状态。温阳健脾法改善CRC术后脾肾阳虚型患者相关临床症状的作用机制可能与其改善患者的肠道微生态环境有关。
