四君子汤对小鼠急性酒精性肝损伤的干预作用及其机制研究

中医中酒精性肝病属于“酒风”、“酒疸”、“酒癖”、“酒臌”、“伤酒”、“胁痛”等范畴。《圣济总录·黄疸门》谓：“大率多因酒食过度,水谷相并,积于脾胃,复为风湿所搏,热气郁蒸,所以发黄为疸。”《金匮要略》又讲“见肝之病,知肝传脾,当先实脾”。“实脾,则肝自愈,此治肝补脾之要妙也”。四君子汤是健脾补气的基本方,常用于治疗具有消化性溃疡、慢性胃炎、慢性结肠炎、慢性肝炎、慢性低热、崩漏等40多种脾虚症状的患者。本试验尝试通过给急性酒精肝损伤的小鼠灌服四君子汤来研究其对急性酒精肝损伤的干预作用及其机制,主要包括以下四个试验。 试验一四君子汤对小鼠急性酒精性肝损伤的干预作用为观察四君子汤对小鼠急性酒精肝损伤的干预效果,我们将100只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、急性酒精肝损伤模型组、四君子汤高、中、低剂量组(20,12,4g/kg)。连续18天(约3个疗程)。模型组和用药组每天灌服生理盐水和相应浓度的四君子汤12h后每只小鼠按5g/Kg灌服50%酒精溶液。分别在D2、D7、D19每组处死5只,比较各组小鼠死亡率、肝脏指数、血清ALT、肝脏病理变化。结果表明,与模型组相比,低、中、高剂量的四君子汤显著降低了死亡率。D2各组病变相近,高剂量的效果较好；D7模型组组织病变最严重,肝脏指数显著下降,ALT显著增高,四君子汤各剂量组均呈现较好的治疗效果；D19低、中、高剂量的四君子汤明显减轻了小鼠肝脏病变。 试验二四君子汤对急性酒精肝损伤小鼠肝组织亚细胞结构的影响 为观察四君子汤对小鼠急性酒精肝损伤的肝脏亚细胞结构的影响,选取模型组病变最严重的D7取样,进行透射电镜观察。模型组细胞形态不规则,细胞核皱缩,线粒体肿胀并有少量裂解且胞浆中有大量空泡；低、中、高剂量组细胞形态良好,细胞核圆；中、高剂量组的线粒体较为正常、胞浆内的空泡随剂量升高而减少减小。 试验三四君子汤对急性酒精肝损伤小鼠肝组织抗氧化能力的影响 摄入过多的乙醇会诱导CYP2E1的大量表达,乙醇通过CYP2E1代谢使机体产生较大的氧化应激,导致膜脂质过氧化、线粒体GSH减少、甲硫氨酸减少,最终损伤肝细胞。本试验通过检测各组小鼠肝脏组织中T-SOD活性、GSH-PX活性、MDA含量与CYP2E1的表达量来评估四君子汤对急性酒精肝损伤小鼠抗氧化能力的影响。结果表明四君子汤并没有提高机体的T-SOD活性,但高剂量(20g/Kg)的四君子汤提高了急性酒精肝损伤小鼠的GSH-PX活力,中(12g/Kg)、局(20g/Kg)剂量都可以减少急性酒精肝损伤小鼠肝脏组织中的MDA含量以及CYP2E1的表达,低剂量(4g/Kg)的四君子汤在连续用药D7时才能降低CYP2E1的表达。 试验四四君子汤对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响 通过不同浓度四君子汤水煎液对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力影响的测定,为四君子汤“健脾功效”在细胞层面上提供佐证。将四君子汤与ConA加入细胞培养液中培养细胞44h、68h后,加入MTT,4h后检测OD值,比较四君子汤单独作用,以及与ConA联合作用下的细胞增殖能力。结果发现,与ConA联合使用时淋巴细胞增殖效果较好,当四君子汤浓度超过2μg/mL时会抑制细胞增殖,低于0.5μg/mL时虽有促进细胞增殖作用但效果不显著,只有在浓度为0.5-2μg/mL浓度范围内时,会显著促进细胞增殖。