牛奶中乳铁蛋白含量变化及其影响因素的研究

本试验较为系统地研究了牛奶中乳铁蛋白含量的变化规律及其影响因素,共包括以下五部分: 第一部分:试验中共采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量,同时通过SDS-PAGE进行相对定量分析,来研究初乳中乳铁蛋白含量的变化规律。结果表明:初乳中乳铁蛋白含量变化较大,尤其是分娩后24 h内下降明显,从1.315 mg/mL降至0.655 mg/mL。 第二部分:从北京4个奶牛场中,通过连续跟踪奶牛乳中体细胞数的变化,选择出处于正常泌乳期内,且两个月内无乳房炎临床症状的荷斯坦奶牛198头。记录奶牛的产奶量同时收集奶牛的个体样品。通过夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的含量,从而确定牛奶中乳铁蛋白含量的影响因素,这些因素包括奶牛胎次、泌乳阶段、产奶量以及体细胞数等。结果显示,正常奶牛乳中乳铁蛋白含量在31.78～485.63 ug/mL之间;乳铁蛋白含量主要受奶牛泌乳阶段和产奶量的影响,与奶牛胎次无关,同时,乳中乳铁蛋白含量与SCS密切相关。这一研究结果表明,牛奶中乳铁蛋白含量也许对于奶牛乳房炎的检测有所帮助。 第三部分:本试验共选用128头奶牛,通过直接测序方法,我们在奶牛乳铁蛋白基因启动区共发现6个SNP,其中2个SNP是首次发现。通过最小二乘,我们分析了这6个SNP所组成的基因型以及单倍体型对乳中乳铁蛋白含量、体细胞数的影响。结果显示,乳铁蛋白的含量以及体细胞数主要受奶牛所处泌乳月的影响,与奶牛胎次、乳铁蛋白基因型、乳铁蛋白单倍体型关系不大(P > 0.05)。 第四部分:本试验目的是通过埋置抗原缓释剂ARD,从而使奶牛产生免疫反应,从而检测免疫条件下牛奶以及血清中乳铁蛋白含量的变化。试验共选择40头健康荷斯坦奶牛,根据奶牛胎次、泌乳日龄以及产奶量划分为试验组和对照组,试验组进行埋置ARD处理,对照组不埋置ARD。通过ELISA方法检测血清以及乳中乳铁蛋白的含量。结果显示,埋置ARD不能显著提高整个试验期内血清以及乳中乳铁蛋白的含量,但是显著提高了乳中7 d和血清11 d时的含量(P < 0.05)。乳中乳铁蛋白含量与血清中乳铁蛋白含量存在很强的相关性(r = 0.564, P < 0.01)。ARD中三个抗原的释放时间是0 d、14 d和28 d,抗原的首次释放显著提高了乳铁蛋白的含量,由此说明乳铁蛋白可能参与了体内的初期免疫应答过程。 第五部分:本试验以小鼠为动物模型来研究免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化。选择120只健康昆明小白鼠,分别于分娩后4 d进行如下处理:A组注射灭菌生理盐水,B组注射Lipase+灭菌生理盐水,C组注射空ISCOM,D组Lipase+ISCOM。并于分娩后8d和12 d(即注射后4 d和8 d)采集各小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳中和血清中的特异性IgG含量,用Real Time PCR检测小鼠乳腺中乳铁蛋白基因的相对表达量。结果表明,正常状态下,小鼠分娩后1 d时,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量较高,而在分娩后4 d、8 d以及12 d时较低。免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因表达显著上升。