PF对TNF-a诱导的HaCaT细胞增殖、STAT-3激活及MMP-2、VEGF分泌的影响

芍药苷是毛银科植物芍药的根部提取物,药理作用广泛,主要有抗炎、调节免疫、护肾、护肝、抗抑郁及影响细胞增殖等作用,占白芍总苷的90%。临床研究发现白芍总苷对银屑病治疗有确切的疗效。 银屑病是一种慢性炎症性、增生性皮肤病,好发于中青年,病情顽固,反复发作并进行性加重,对人体构成了很大危害。其组织病理主要表现为角质形成细胞(keratinocyte,KC)过度增殖和分化异常,炎症细胞浸润和真皮毛细血管增生,延长,迁曲和扩张。STAT-3参与细胞内信号传递,在细胞因子网络调节中发挥重要作用,调控众多的细胞因子和炎症介质的基因表达,调节免疫反应,参与银屑病发病。因此,STAT-3是银屑病治疗的一个重要靶点。 本论文的主要目的是研究芍药苷在体外对STAT-3激活及STAT-3激活后引起的细胞增殖,及下游细胞因子MMP-2,VEGF分泌增加的影响,以期从STAT-3的新角度阐明芍药苷的作用机制,为芍药苷在临床上应用于银屑病及表皮增殖性皮肤病的治疗提供基础和实验依据。 针对以上研究目的,设计实验、结果如下: ①TNF-a诱导HaCaT细胞增殖,STAT-3激活及MMP-2、VEGF的分泌:用TNF-a 10ng/ml诱导HaCaT细胞,倒置显微镜观察HaCaT细胞的形态变化,刺激组细胞较正常对照组比,细胞数量明显增多,细胞形态无明显差别;MTT比色法检测细胞增殖率发现,TNF-a刺激后细胞显著增殖,达201%。用western-blot检测激活的STAT-3(p-STAT-3),发现经未经刺激无p-STAT-3表达,TNF-a刺激后p-STAT-3表达明显;荧光定量PCR检测STAT-3mRNA及激活的STAT-3下游细胞因子MMP-2,VEGF的mRNA的表达,结果发现刺激后STAT-3mRNA表达无明显改变,MMP-2,VEGF表达明显增强。 ②芍药苷对TNF-a诱导的HaCaT细胞增殖、STAT-3激活及MMP-2、VEGF的分泌的影响:设计实验组干预组为浓度梯度组和时间梯度组。倒置显微镜观察浓度组和时间组HaCaT细胞的形态的变化,各浓度和时间组细胞形态均正常,各浓度组间无明显差别,与TNF-a刺激比,细胞密度稍稀疏,干预24h后最明显;MTT比色法检测芍药苷干预对经TNF-a刺激后的HaCaT细胞的增殖的抑制情况,结果发现芍药苷对诱导后HaCaT细胞增殖抑制率呈时间和浓度依赖性;western-blot法检测各浓度对激活的STAT-3(p-STAT-3)的变化,结果发现各浓度对激活的STAT-3无明显逆转作用;荧光定量PCR检测干预组对STAT-3mRNA及激活的STAT-3下游细胞因子MMP-2、VEGF的mRNA的表达变化,结果发现干预组对STAT-3mRNA的表达无明显影响,对刺激后HaCaT细胞MMP-2和VEGFmRNA的表达均有一定程度的下调。 总之,本实验结果表明芍药苷不仅能够抑制TNF-a诱导的HaCaT细胞增殖,而且能够下调银屑病相关细胞因子VEGF、MMP-2的表达,但对激活的STAT-3无明显逆转作用。