生理周期及致痫后雌性大鼠海马细胞色素P450芳香化酶的动态表达

目的:(1)观察雌性大鼠不同生理周期细胞色素P450芳香化酶在海马神经元和星形胶质细胞的表达;(2)观察去势雌性大鼠致痫后不同时间点细胞色素P450芳香化酶在海马神经元和星形胶质细胞的表达变化,及其与癫痫发作严重程度的关系,了解内源性雌二醇的合成来源。 方法:(1)成年Sprague-Dawley(SD)大鼠(体重250±10g)分为六组:雌性大鼠动情前期组、动情期组、动情后期组、动情间期组、去势组及雄性大鼠组,每组6只,心脏灌流断头取脑后行冰冻切片;(2)将成年SD雌性大鼠(体重250±10g)行双侧卵巢切除术后饲养2周(目标体重290±10g),术后第15天随机分为12组,每组6只,其中6组为KA组,6组为NS对照组,制备杏仁核点燃模型,记录模型点燃的潜伏期、观察癫痫发作的频率及程度,各组分别在点燃成功后第1、2、3、4、5、6小时心脏灌流断头取脑后,行冰冻切片;(3)免疫荧光双标法检测细胞色素P450芳香化酶在海马神经元和星形胶质细胞的表达变化:a、NeuN、GFAP分别标记神经元和星形胶质细胞;b、Aromatase抗体标记芳香化酶c、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜观察芳香化酶及其细胞定位;(4)图片行细胞计数进行定量分析。 结果:(1)免疫荧光结果显示:大鼠海马CA1-CA3区及DG区均可见到芳香化酶免疫阳性表达,其中CA1区、DG区表达较为明显,且细胞浆、细胞核均有表达,免疫荧光双标染色显示芳香化酶主要表达于神经元上;(2)动情期雌性大鼠海马各区免疫阳性细胞数均较其他各期增多,其中CA1区、DG区的差异有统计学意义(p＜0.05),去势后的雌性大鼠海马芳香化酶表达下降,与各生理周期相比均有统计学差异(p＜0.05);(3)雄性大鼠海马芳香化酶的表达高于雌性大鼠各生理周期,差异有统计学意义(p＜0.05);(4)致痫后1～6小时,海马芳香化酶的免疫阳性细胞仍以神经元表达为主,表达无明显变化趋势,差异没有统计学意义,与NS组比较差别也无统计学意义;(5)致痫后5～6小时,芳香化酶在星形胶质细胞上表达明显增多,主要见于CA1区,与之前0～4小时相比差异有统计学意义(p＜0.05),与NS组对应时间点相比,差异也有统计学意义(p＜0.05);(6)KA注射后20-30min出现轻度痫性发作,3小时发作程度最重,随后呈下降趋势,芳香化酶在星形胶质细胞上的表达与癫痫发作程度无相关性。性雌二醇以神经元合成为主;2)不同生理周期雌性大鼠海马芳香化酶表达存在动态变化,动情期表达最高,故考虑不同生理周期雌性大鼠海马内源性雌二醇的合成存在动态变化;3)大鼠海马芳香化酶的表达存在性别差异;4)癫痫发作后芳香化酶仍以神经元表达为主,星形胶质细胞可见少量表达,考虑癫痫发作后海马内源性雌二醇合成仍以神经元合成为主;5)致痫后,芳香化酶在神经元上的表达无明显变化,海马内源性雌二醇的变化可能与芳香化酶蛋白含量变化无关;6)在癫痫发作末期出现芳香化酶在星形胶质细胞上的表达明显增加,考虑星形胶质细胞合成雌二醇。