黄芩苷治疗妊娠期高血压疾病的研究

第一部分中医药治疗妊娠高血压综合征的文献研究目的和方法妊娠期高血压综合征属“子痫”、“子晕”、“子肿”的范畴。通过总结近26年来以中医药治疗妊娠高血压综合征相关疾病的文献报告,对妊娠高血压综合征常见的中医辨证进行简单的统计学分析及常用的中药进行频数、频率统计分析。结果及结论通过简单的统计学分析,得出本病中常见的中医证型中前9位依次为:脾虚水泛证、肝火炽盛证、肝阳上亢证、脾虚肝旺证、湿热瘀结证、脾肾阳虚证、痰浊上扰证、肝肾阴虚证以及气血两亏证。常用中药前20位依次为:茯苓皮、白术、当归、黄芪、砂仁、泽泻、车前子、山药、陈皮、龙骨、牡蛎、桑寄生、枸杞、白芍、天麻、钩藤、黄芩、菊花、山萸肉、杜仲。通过对妊娠期高血压综合征总体的中医辨证分型及总体中药的研究,便于对妊娠期高血压综合征进行证型的统一和选取最佳治疗效果的中药,总结病因病机和用药规律,便于证型的标准化和选方用药的统一化。第二部分黄芩苷对子痫前期脐静脉细胞MAPK信号通路的影响目的近年来研究发现,MAPK是介导内皮细胞炎性反应和炎性因子表达的重要信号转导通路,MAPK信号转导通路可能参与介导了子痫前期发病机理中血管内皮细胞的损伤。通过对中医药治疗妊娠期高血压疾病的治疗规律文献研究中我们发现黄芩是一个用药频率比较高的药物,说明了黄芩广泛应用于妊娠期高血压疾病的应用。在探讨子痫前期内皮细胞的损伤的过程中,我们发现中药黄芩的有效提取成份可能对内皮细胞的损伤具有保护作用。中药黄芩为唇形科植物,现代药理研究表明黄芩具有抗菌、抗感染、抗炎、抗氧化、镇静及心血管和保护内皮损伤的等多种药理作用。黄芩苷为黄芩的主要有效成分之一。研究发现[1],黄芩苷的抗炎作用主要是通过抑制MAPK信号通路的磷酸化水平及提高抗炎因子的表达水平来发挥其抗炎作用。本实验通过培养HUVEC,通过构建人的内皮细胞损伤模型,研究中药单体黄芩苷对MAPK信号通路的影响。探讨黄芩苷对子痫前期疾病的防治可能具有的作用机制,为黄芩苷在以后的临床作用中广泛应用提供理论依据。方法先培养人的脐静脉内皮细胞,然后分组。第一大组:(1)在高糖的DMEM培养基的环境下,以子痫前期孕妇血清构建内皮细胞损伤模型,于血清干预48h后收集脐静脉内皮细胞,Western Blot与RT-PCR法分别检测子痫前期轻度组、重度组及正常妊娠组MAPK信号通路(p38、JNK通路等)及ICAM-1的蛋白的表达及m RNA转录情况;第二大组:特异性抑制剂组:在高糖环境下,以子痫前期孕妇血清构建内皮细胞损伤模型,并在干预48小时后,加入p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580、JNK通路特异性抑制剂AEG3482,然后分别在低糖的DMEM环境下干预子痫前期轻度及子痫前期重度组24小时,观察P38、JNK通路的激活是否影响ICAM-1的表达。第三大组:高糖环境下,以子痫前期血清干预脐静脉内皮细胞48h小时后,再加入黄芩苷60ug/ml在低糖环境下干预24h,检测黄芩苷干预后MAPK信号通路(p38、JNK通路)及ICAM-1蛋白及m RNA表达,观察黄芩苷加入细胞后是否有效阻断了MAPK信号通路中两个亚家族(p38、JNK通路)的激活(磷酸化)及影响ICAM-1的表达。结果1.与正常妊娠组相比较,子痫前期轻度妊娠组及子痫前期重度妊娠组p-P38MAPK、p-JNK及ICAM-1三者的蛋白表达的相对表达水平及P38MAPK、JNK及ICAM-1m RNA的相对表达量显著升高,两者相比较有统计学意义。且进一步研究发现子痫前期重度组这三项指标的蛋白及m RNA的相对表达量均高于子痫前期轻度组,两者比较有统计学意义。2.特异性抑制剂组与单纯血清干预组比较:p38抑制剂组:轻度及重度子痫前期组p-p38和ICAM-1的蛋白质的相对表达量及m RNA的相对表达量较轻度以及子痫前期重度组均有降低;JNK抑制剂组:轻度及重度子痫前期组经JNK抑制剂AEG3482干预后的ICAM-1、p-JNK的蛋白及m RNA的表达量较轻度及重度子痫前期血清组均有降低。3.黄芩苷干预组:加入黄芩苷后的轻度及重度子痫前期组p38MAPK、JNK/SAPK磷酸化的蛋白及ICAM-1的相对表达水平及m RNA的相对表达量均有明显下降,而正常妊娠组在黄芩苷干预24小时后与未用黄芩苷组相比p-p38、p-JNK及ICAM-1蛋白的相对表达量及m RNA的相对表达量无明显变化。结论子痫前期孕妇血清可以刺激人的脐静脉内皮细胞中p38MAPK,JNK通路的活化及内皮细胞表面黏附分子的表达量增加,这种激活作用与子痫前期疾病的病情轻度有关,p38及JNK的表达及活化以及ICAM-1的表达量随着病情的加重而增加,黄芩苷能够显著抑制内皮细胞损伤模型中对内皮细胞具有损伤作用的ICAM-1的表达,这种现象的产生极有可能与抑制了MAPK信号通路中JNK与P38MAPK通路的活化有关,从而得出结论中药黄芩苷对内皮细胞的损伤具有独特的保护作用。