炎症是感染及许多疾病最基本的病理过程。临床上常用的抗炎药物主要有非甾体抗炎药和甾体抗炎药,其临床疗效显著,但副作用频见报道。炎症和免疫在组织、细胞、分子水平上是紧密联系不可分割的过程,故单独应用抗炎药或免疫抑制药或免疫增强药治疗慢性炎症性疾病疗效均不理想。因此,寻找低毒高效的新型抗炎免疫调节药一直是药物研究的一个重要领域。丁香苷(Syringin)是从刺五加根茎中提取分离得到的一种典型的酚苷类化合物,也是祖师麻、救必应、天女木兰、关东丁香等中药的主要成分,是药材及其制剂含量测定的指标成分之一。从其化学结构分析,丁香苷的苷元为芥子醇,其衍生物属于苯丙醇类物质,具有抗氧化活性。目前丁香苷的研究多集中在含量测定方法的建立上,而对其生物活性的研究还较少。
本课题采用多种急、慢性炎症和免疫性炎症模型,以及机体免疫药理实验,研究丁香苷(Syringin)抗炎免疫作用并探讨其部分作用机制。实验分为三个部分：
1、丁香苷抗炎作用及部分机制研究
以阿司匹林作阳性对照药,观察丁香苷对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀、棉球致大鼠肉芽肿的抗炎作用；同时测定角叉菜胶致大鼠炎足炎性渗出物中的PGE2、MDA和血清中的NO、SOD,初步探讨丁香苷抗炎的部分机制。结果表明,丁香苷对急慢性炎症反应有明显抑制作用,能明显降低角叉菜胶致炎足炎性渗出物中PGE2、MDA和血清中NO含量,明显提高血清中SOD的活性。因此,丁香苷具有较强的抗炎作用,其机制可能与抑制PGE2、NO等炎症介质生成、增强自由基清除能力有关。
2、丁香苷的免疫调节作用
腹腔注射环磷酰胺复制免疫功能低下的动物模型。采用碳廓清实验测定单核巨噬细胞吞噬功能；血清溶血素抗体生成实验、脾细胞溶血素生成实验测定体液免疫功能；MTT法检测刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖反应,二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene, DNFB)诱导迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivity, DTH)实验模型测定细胞免疫功能。结果表明,丁香苷可提高免疫低下小鼠的碳廓清指数K值,提高免疫低下小鼠巨噬细胞吞噬功能。丁香苷可提高免疫功能低下小鼠血清中和脾细胞溶血素水平,提高免疫低下小鼠的体液免疫功能。丁香苷可提高免疫低下小鼠的脾淋巴细胞增殖反应,拮抗免疫低下小鼠耳肿胀度的减轻,使其接近正常水平,提高免疫低下小鼠的细胞免疫功能。这些结果提示丁香苷通过提高免疫低下小鼠非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫,而增强免疫低下小鼠的免疫功能。
3、丁香苷对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及机制
采用大鼠足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型。足容积法测量继发侧足肿胀度,进行疼痛评分和多发性关节炎评分,MTT法检测刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖反应,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定刀豆蛋白(ConA)诱导的脾淋巴细胞产生IL-2的水平以及脂多糖(LPS)诱导的腹腔巨噬细胞(PMφ)产生IL-1β和TNF-α的水平。结果表明,大鼠致炎后第14天,继发性关节炎出现,同时灌胃给予不同剂量的丁香苷及阳性对照药雷公藤多苷,连续给药16天。丁香苷剂量组于第22天开始不同程度降低AA大鼠继发侧关节肿胀度、关节疼痛评分、多发性关节炎指数；同时各剂量组可不同程度地提高AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应和脾细胞IL-2的产生,降低AA大鼠PMφ产生过高的IL-1β和TNF-α。这些结果提示丁香苷改善AA大鼠异常的细胞免疫功能,调节细胞因子的平衡可能是其治疗AA大鼠继发性炎症的作用机制。
