三七茎叶黄酮类成分的研究

三七[Panax Notoginseng(Burk.)EH.chen]又名参三七、田七、三七、金不换，为五加科人参属多年生草本植物，是一种用途比较广泛的名贵中药材，主要分布于我国西南部。药理研究表明，三七具有抗氧化、抗衰老、抗炎、护肝利胆、止血、抗冠心病、抗心律失常、扩张血管和降压等作用。至今为止，三七及三七茎叶化学成分的研究主要集中在皂苷类成分上，而关于对治疗心脑血管疾病有明显疗效的黄酮类成分的分离鉴定、含量测定、药理活性研究却鲜见报道。 本实验从三七茎叶中提取、分离到了七个黄酮类单体化合物，根据其理化性质和光谱分析鉴定出了其中六种的结构，分别是山柰酚-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷(SA)、槲皮素-3-O-B-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷(SB)、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷(SC)、山柰酚(SG)、槲皮素(SH)、山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷(SI)。除山柰酚与槲皮素之外，其余五种化合物皆为首次从本植物中分离得到。本实验还建立了山柰酚-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷与槲皮素-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷这两种主要黄酮成分的HPLC含量测定方法，并且对三七叶中所含的这两种成分进行了含量测定。 一．黄酮类单体化合物的提取、分离、鉴定 1．实验材料与仪器 ABI公司(美国应用生物系统公司)Q-STAR质谱仪，BRUKER AV600型质谱仪(600HZ)，美国尼高立公司AVATAR 330型红外光谱仪，Unico UV-2102 PCS型紫外可见全波长扫描仪，Koffiler显微熔点测定仪(未校正)，硅胶(柱层析，200-300目)青岛海洋化工厂 吉林大学硕士学位论文 出品，ODS OUYA一RP18(40一60um)北京金欧亚科技发展公司出品， AB一8大孔吸附树脂(0 .3一1.25mm)南开大学化工厂出品，其余试剂 皆为分析纯。三七茎叶采于云南省文山县，经吉林大学药学院生药 教研室王广树鉴定为三七【Panax Nofoginseng(B urk.少F.日.Chen】的茎叶。 2.提取分离 将干燥的三七茎叶ZKg粉碎后加水煎煮提取三次(用水量分别 为3OL、24L、20L;煎煮提取时间分别为2h，，.sh，，h)，合并三次提取 液通过大孔吸附树脂柱吸附，水洗，95%的乙醇解吸。浸膏用硅胶柱 以氯仿一甲醇为洗脱剂梯度洗脱得到化合物SA(4 29)、sB(3 .19)、 sG(195mg)、sH(22mg)、51(35mg)。以oDS柱以甲醇水梯度洗脱 得到SC(68mg)、SD(gmg)。 3.结构鉴定 通过其理化性质、紫外光谱、红外光谱、ESI一MS、，HNMR、，℃NMR 鉴定并与文献对照确定SA为山奈酚一3一O一p一O一半乳糖一(2-+ 1)葡萄糖普，SB为檄皮素一3一O一p一O一半乳糖一(2一1)葡萄 糖普、SC为山奈酚一3一O一p一O一半乳糖普、SG为山奈酚、S日为 榭皮素、Sl为山奈酚一7一O一a一L一鼠李糖普。通过50理化性质、 紫外光谱、ESI一MS、IHNMR、13CNMR鉴定SD为山奈酚的C3一OH上 连有两分子糖的化合物，而且糖的某个O日被乙酞化，其结构正在进 一步鉴定当中。 二.三七茎叶中SA、SB的含量测定 2.，仪器及试药 仪器设备:Agilent 1100 Series高效液相色谱仪，ZORBAX Extend 一C18 4.6x250mm ODS，spm色谱柱 试药:三七叶采自云南省文山县，甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯. 吉林大学硕士学位论文 2.2方法与结果 2.2.1色谱条件:流动相为甲醇:水(35:65)，含0.1%的乙酸;流速 1.2m}/min;检测波长268nm;柱温25oC。 22.2标准曲线的绘制 在0.5一20阳范围内SA、SB进样量与峰面积均呈现良好的线性 关系。 SA标准曲线为:y=1312.5x+92.5r=0.9999; SB标准曲线为:y=1157.6x一75.7r=0.9999。 22.3重现性实验 SA及S日的6次进样的峰面积RSO值SA为0.26%，S日为0.44%， 表明方法重现性良好. 2.2.4精密度实验 同一样品五次平行测定，SA含量的RSO值为0.41%，SB含量的 RSO值为0.43%，表明方法精密度良好。 2.2.5稳定性实验 同一样品溶液每2小时进样一次，计算其峰面积RSO值SA为 0.42%，SB为0.54%，表明样品水溶液在0一12小时内稳定性良好，。 2.2.6回收率实验 SA平均回收率为97.5%，RSO为0.78%;SB平均回收率为10，.8 %，RSO为1.，0%，表明方法回收率良好。 2.2.7三七叶黄酮类成分SA、SB含量测定 利用水煎煮，大孔吸附树脂吸附提取，测得三七叶中SA含量为 0.17%，SB含量为0.30%;利用甲醇回流提取测得三七叶中SA含量 为0.加%，S日含量为0.38%，水提取率为甲醇提取率的80%，