猪胆粉中结合型胆甾酸的化学成分及生物活性研究

猪胆粉为猪科动物猪Sus scrofa domestica Brisson胆汁的干燥品,味苦、性寒,归肝、胆、肺、大肠经,具有清热、润燥、解毒、止咳平喘的功效,为2010版《中华人民共和国药典》收载品种。猪胆粉中的主要化学成分为胆汁酸类,包括水溶性结合型胆酸和脂溶性游离型胆酸。现代药理学研究表明胆汁酸具有抗菌、抗炎、抗癌、利胆、降血脂等生物活性。受科学技术发展的限制,以前对猪胆粉的研究主要集中在其游离型胆酸,对结合型胆酸研究较少,而胆汁酸以结合型胆酸为主。本课题从提取分离、结构鉴定、定量分析、药理活性等方面对猪胆粉中的结合型胆酸进行系统研究,为猪胆粉的进一步开发利用,寻找创新药物奠定实验基础。 一、猪胆粉中结合型胆酸的分离及制备 本实验将猪胆粉药材用95%乙醇超声提取后,分别用硅胶干柱层析、硅胶柱层析、制备型高效液相色谱和高速逆流色谱等分离方法对猪胆粉中的成分进行分离,得到8个化合物,其中6个为结合型胆酸。通过理化常数测定及光谱法分析(UV, IR, MS,1HNMR和13C NMR)鉴定了结构,分别为：胆固醇、猪去氧胆酸、甘氨猪胆酸、甘氨猪去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺猪胆酸、牛磺猪去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸。此外,本实验采用化学混酐法合成了牛磺猪去氧胆酸单体化合物。这些研究为进一步的药物分析及药理学研究提供了物质基础。 二、猪胆粉中结合型胆酸的定量分析 本课题承担了2010版《中华人民共和国药典》标准研究课题：猪胆粉含量测定项的修订。实验中采用HPLC法,考察了不同产地猪胆粉药材中牛磺猪去氧胆酸的含量,制定了其含量限度。以上研究结果经黑龙江省食品药品检验所复核后,通过国家药典委员会审核收入2010版《中华人民共和国药典》(增补本)中。此外,实验中分别采用HPLC和MEKC法对猪胆粉中的多种结合型胆酸进行同时测定,并建立了猪胆粉的特征图谱,为猪胆粉药材的质量控制提供科学依据。 三、猪胆粉药材中结合型胆酸的生物活性研究 采用二甲苯致小鼠耳肿胀法和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法评价了结合型总胆酸的抗炎作用；以小鼠热板法、醋酸扭体法和光照甩尾法评价了结合型总胆酸的镇痛作用。实验结果显示结合型总胆酸能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及角叉菜胶致大鼠足趾肿胀,增加小鼠热板法痛阈时间,延长小鼠光照甩尾潜伏期,抑制醋酸扭体法扭体次数,表明结合型总胆酸具有良好的抗炎镇痛作用。 采用三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠首次研究了结合型总胆酸和牛磺猪去氧胆酸对实验性溃疡性结肠炎的治疗作用。研究发现,结合型总胆酸和牛磺猪去氧胆酸大、中、小剂量均能显著降低溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织中髓过氧化物酶活性和环氧合酶2的表达,并能显著降低小鼠血清中白介素6和肿瘤坏死因子α的水平,表明结合型总胆酸及牛磺猪去氧胆酸具有抗炎及促进组织修复作用,并能调节免疫,对实验性溃疡性结肠炎具有一定的治疗作用,为进一步的研究开发和临床应用提供科学依据。