SR-B1基因在大鼠卵巢和子宫中的表达及调节

SR-B1作为高密度脂蛋白的生理性受体,参与高密度脂蛋白—胆固醇酯的选择性吸收和类固醇激素的生成。尽管SR-B1在肝脏、肾上腺和卵巢等的功能已有很多研究,但其在大鼠发情周期的卵巢和子宫的表达研究较少。本论文应用IHC、real-time PCR和western blot等方法,在分析大鼠正常发情周期的卵巢和子宫SR-B1表达的基础上,检测了外源类固醇激素处理对其表达的影响,为研究SR-B1在卵巢卵泡发育、黄体发育和子宫功能等方面发挥作用提供试验依据。此外,我们利用亚砷酸钠构建大鼠特异性卵巢氧化应激模型,对SR-B1及类固醇激素合成关键基因StAR、P450scc和3β-HSD的表达进行检测,对进一步了解SR-BI和StAR等基因参与机体内类固醇激素生成,解释亚砷酸钠干扰卵巢的正常生殖生理的机制具有一定的科学价值。主要内容如下:1 SR-B1在大鼠发情周期卵巢和子宫中的定位与表达为了研究SR-B1在大鼠发情周期卵巢和子宫中的定位与表达,通过阴道涂片法确定发情周期,real-time PCR结果显示卵巢SR-B1 mRNA在大鼠发情前期至发情后期的表达水平持续升高,而在间情期的表达显著降低（P<0.05）;且western blotting结果显示其表达模式与mRNA的相似。子宫SR-B1的mRNA和蛋白的表达模式也一致:在发情前期表达水平显著高于其他时期（P<0.05）。免疫组化结果发现SR-B1蛋白主要定位于各级卵泡的卵母细胞和膜细胞质中,在间质和黄体中也存在表达。在发情周期任何阶段的黄体上表达很强,但不在颗粒细胞中表达。SR-B1主要定位在细胞质和质膜中,而不是在细胞核上。在子宫中,SR-B1蛋白主要定位于子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞质,在平滑肌细胞质上也有强表达,而在间质细胞上几乎无表达。由上述结果可知,SR-B1在大鼠发情周期卵巢和子宫上表达,可能参与卵泡发育、黄体功能和子宫功能的调节。2外源性类固醇激素对大鼠卵巢和子宫SR-B1表达的影响为了研究卵巢和子宫SR-B1在大鼠发情周期中的调控机制,利用17β-雌二醇（E2）、孕酮（P4）、或其抑制剂处理未性成熟大鼠,连续注射三天（从出生后第24天至26天）。结果发现类固醇激素可促进大鼠卵巢和子宫的增重。Real-time PCR和western blotting结果均表明,经过E2处理后,大鼠卵巢和子宫的SR-B1表达水平均显著高于其它处理组（P<0.05）。而P4单独处理的效果不明显（P>0.05）,E2和P4协同处理却能够显著促进卵巢和子宫SR-B1的表达（P<0.05）;采用雌激素受体拮抗剂（ICI 182780）预处理,显著降低雌激素诱导的SR-B1的表达水平（P<0.05）,而孕激素受体拮抗剂（RU486）则对SR-B1表达没有显著影响（P>0.05）。上述结果证实,雌激素可显著促进SR-B1在早期大鼠卵巢和子宫的表达,且雌激素受体参与了雌激素介导的SR-B1表达调控。3大鼠卵巢氧化应激模型构建及类固醇激素合成相关基因的表达机体内SR-B1和StAR等基因在类固醇激素的合成过程中发挥重要作用。为了进一步检测SR-B1和StAR等类固醇激素合成相关基因在大鼠卵巢氧化应激状态下的表达情况,利用亚砷酸钠构建大鼠卵巢氧化应激模型,并对其进行评估和检测。20只成年大鼠平均随机分为对照组和处理组,分别隔日腹腔注射生理盐水和亚砷酸钠溶液。通过HE检测卵巢的组织形态学,放射免疫测定血清性激素水平,生化比色法测定组织氧化标记物来评价氧化应激模型。利用real-time PCR方法检测卵巢SR-B1、StAR、P450scc和3β-HSD基因的表达水平。结果发现:与对照组相比,处理组卵巢的组织结构破坏,卵泡大量闭锁;雌激素和孕激素水平显著降低;氧化标记物中的活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）含量显著升高,但谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著降低;定量PCR结果表明处理组的4个基因表达水平显著降低（P<0.05）。本试验证实了这些类固醇激素合成关键基因在大鼠卵巢氧化应激时的表达受到干扰和破坏,这为解释亚砷酸钠干扰哺乳动物卵巢的正常生殖生理机制提供理论依据。