款冬花多糖提取及分离纯化工艺研究

款冬花系菊科植物款冬的干燥花蕾,是我国传统的中草药,在医疗单位处方和民间验方、偏方等也多采用款冬花治疗急慢性气管炎、肺结核等症。多糖具有抗氧化性、抗肿瘤、抗病毒、抗溃疡、抗突变、降血脂、降血糖等作用,在医药领域应用广泛。 本课题以陕南中药材款冬花为研究对象,重点对款冬花多糖的提取和款冬花多糖脱蛋白、脱色纯化工艺进行了研究,并对其抗氧化活性以及结构鉴定进行了初步的探索。 主要研究成果如下： (1)款冬花多糖的优化提取工艺 通过对不同提取方法的对比研究,得到了一条原料预浸泡-超声-水提法组合工艺从款冬花中提取多糖的优化路线,在单因素试验的基础上,通过响应面分析法得到了该工艺路线的的最佳工艺条件：料液比1：10 g／mL,预浸泡时间5h,温度71℃,超声时间33min,水提时间1.5h,多糖提取率达到19.48%。 (2)款冬花多糖脱蛋白工艺 通过对盐酸法、三氯乙酸法、Sevage法、胰蛋白酶-Sevage法和木瓜蛋白酶-Sevage法等5种脱除蛋白方法的对比研究,结果表明木瓜蛋白酶-Sevage法最为理想,该法的最佳工艺条件为：木瓜蛋白酶的酶底比为1%,pH值7.0,先在50℃水浴中酶解2h,再经Sevage法脱蛋白3次,其蛋白脱除率为88.95%,多糖保留率为92.63%。 (3)款冬花多糖脱色工艺 通过对双氧水氧化法、活性炭吸附法、反胶束溶液法和大孔树脂吸附法等4种方法的研究,结果表明大孔树脂吸附法对款冬花多糖的脱色效果最为理想,同时也能脱除部分蛋白质。通过对6种吸附树脂研究表明,LS-206树脂最为理想,该法最佳吸附工艺条件为：流速1BV／h,上样量为1.5BV,上样浓度为6mg／mL。经大孔树脂脱色后的脱色率可达94.20%,多糖保留率为73.03%。经过脱蛋白工艺及脱色处理后,蛋白质总去除率可达97.40%。 (4)款冬花多糖的抗氧化性 试验结果表明,款冬花多糖能有效的清除超氧自由基、羟自由基、亚硝基和DPPH这四种自由基,尤以对亚硝基、DPPH自由基有着明显的清除作用,且超声辅助提取多糖清除作用略优于水提多糖,且随着对多糖的不断纯化,其清除率也不断提高。 (5)结构初步解析 对款冬花超声提取多糖纯化组分进行了一级结构初步解析,采用凝胶渗透色谱法得出其分子量约为169800Dal；经气相色谱分析单糖组成为甘露糖和半乳糖,摩尔比约为：1.83：1。