基于不同极性部位的藏茵陈指纹图谱质量及药理活性研究

藏茵陈为龙胆科一年生草本植物,具有清热解毒,清肝利胆的功效。藏茵陈基源复杂,据统计主要有龙胆科獐牙菜属、花锚属、扁蕾属、喉毛花属的数种植物以及虎耳草科虎耳草属的数种植物,由于市场上购买到的藏茵陈都是经一定的方法处理后的非完整植株,从形态学角度很难准确区分它的基源;藏茵陈保肝方面药理研究报道仍未阐明发挥作用的主要成分;藏茵陈质量标准不完善有待提高。为此,本文以基源相关性和谱效研究为主线,建立了藏茵陈石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水四个极性部位的指纹图谱,以相似度分析、主成分分析和聚类分析评价不同极性部位指纹图谱,为判别不同基源的藏茵陈归属提供参考;分别采用转基因斑马鱼和昆明种小鼠对藏茵陈不同极性部位进行肝脏保护药理活性筛选,明确主要有效部位,为藏茵陈抗肝癌研究提供参考;分别采用HPLC对藏茵陈中环烯醚萜苷单体的含量进行测定,采用UV对藏茵陈环烯醚萜苷总体的含量进行测定,为完善藏茵陈质量标准奠定基础。1.藏茵陈不同极性部位指纹图谱与基源相关性研究运用HPLC建立了10批藏茵陈共有模式指纹谱图,四个部位分别确立了9、15、14和14个共有峰,采用相似度分析、聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行判别分析,三种判别模式分析显示水部位的聚类结果与藏茵陈的来源呈正相关。2.藏茵陈不同极性部位对转基因斑马鱼新生血管生成的抑制作用以及对小鼠CCl4肝损伤的保护作用研究选用TG品系flila-EGFP转基因的斑马鱼动物。分析各极性部位样品对其体节间血管生成的影响,结果表明藏茵陈水部位与正丁醇部位的样品提取物对斑马鱼新生血管有抑制作用。采用CCl4小鼠急性肝损伤模型。测定血清AST和ALT活性,采用独立样本t检验分析,结果初步显示藏茵陈水、正丁醇及乙酸乙酯部位样品对CCl4造成的小鼠肝损伤有一定的缓解作用,其中水部位高低剂量组和正丁醇部位高剂量组P<0.001,有极显著性不同,保肝效果较好。3.HPLC测定藏茵陈环烯醚萜苷单体的含量采用HPLC对10批藏茵陈开展了獐牙菜苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷4种有效成分的含量测定。结果显示,同一来源样品都呈现出:最大含量为芒果苷;同一成分不同来源含量相差较大。4.UV测定藏茵陈环烯醚萜苷总体的含量采用UV对10批藏茵陈开展了含量测定。结果显示藏茵陈全草样品总环烯醚萜苷含量最高的批次为西藏购买的S3,其含量为6.67%;含量最低的批次为新都购买的S2,其含量为3.06%。