桑寄生总黄酮祛风湿功效物质及归经研究

目的:建立桑寄生总黄酮祛风湿有效部位制备工艺,观察TFHT对佐剂性关节炎大鼠的药效作用,探讨TFHT祛风湿的功效物质及其在AA大鼠及正常大鼠体内分布。方法:1.考察了乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度4个因素对桑寄生总黄酮得率的影响。以粗提液中的黄酮含量为指标,确定提取条件。比较4种树脂的吸附及解吸附性能来确定最佳树脂。通过考察上样液浓度、上样流速等因素来得知大孔树脂对TFHT动态吸附性能的影响,确定吸附条件。考察洗脱剂乙醇的浓度及流出液的流速等因素来了解大孔树脂对TFHT动态解吸性能的影响,确定解吸条件。2.TFHT对佐剂关节炎大鼠模型的药效作用及相关功效物质的研究:将雄性SD大鼠随机分为正常、模型、阳性、正常给药、TFHT高、中、低剂量组。除正常和正常给药组注射0.1m L生理盐水外,其余各组均注射相同体积的弗式完全佐剂。造模后观察8d,于第9d起开始灌胃。正常组、正常给药组、模型组给予0.5%CMC-Na溶液灌胃,阳性组给予雷公藤多苷混悬液（1mg/m L）,TFHT高、中、低剂量组给予TFHT高（360mg/kg）、中（180mg/kg）、低（90mg/kg）剂量的CMC-Na溶液。每日早晨灌胃一次,连续22d。从第15d起,每7d测量一次足趾肿胀度及进行一次关节评分。于灌胃给药后的第22d将所有的大鼠称重,TFHT高剂量组及正常给药组共54只大鼠于不同时间点进行腹主动脉取血,立即取出胸腺、心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、大肠、小肠等组织并称重,其余大鼠均在2h后进行上述操作。取左后足踝关节（除正常给药组大鼠外）做病理切片观察。酶联免疫吸附测定法测定血清中TNF-α,IL-10、IL-6的含量。HPLC法测定高剂量组及正常给药组大鼠各组织中芦丁、萹蓄苷、槲皮苷的含量,使用DAS3.0软件进行数据处理,分析药动学参数。结果:1.在桑寄生总黄酮制备工艺实验中,确定最佳提取条件为:70%（v/v）乙醇、料液比为1:20、80℃条件下提取2次,每次1.5h。优选出最佳纯化条件为:上样浓度（生药/药液）为0.08g/m L的TFHT粗提液先调以PH值为5,将上样流速调以2BV/h通过AB-8树脂柱（1BV=25m L）,静置后,用大量蒸馏水淋洗除杂,再用5BV的50%（v/v）乙醇,将流速调至2.5BV/h来进行洗脱并收集洗脱液体,经浓缩、干燥后得红棕色粉末,即纯化后的TFHT。UV测定TFHT含量,得总黄酮含量为56.73%,得率为5.5%。2.TFHT高、中剂量组能够明显改善佐剂性关节炎组大鼠足趾肿胀程度及大鼠全身症状;降低免疫器官系数;降低血清中IL-6、TNF-α的含量、升高IL-10的含量;病理切片显示踝关节软骨破坏明显减轻,渗出物及血管翳生成减少或无。药效学实验表明了桑寄生总黄酮具有显著的祛风湿和逆转骨关节破坏的作用。3.在佐剂性关节炎模型大鼠组织中,维持时间比较结果是槲皮苷为肝=肾=心=脑=脾=小肠>大肠=肺>胃>血清,萹蓄苷为肾=胃>小肠=脑>心。槲皮苷在组织中的AUC0-t依次为胃=肾=肝>脾>小肠>脑>心>肺>大肠>血清,萹蓄苷在组织中的AUC0-t依次为胃>肾>小肠>脑>心,芦丁只在血清和胃里有少量分布。在正常给药组大鼠组织中,维持时间比较结果是槲皮苷为肾=肝=胃=小肠>脑>大肠>心>脾>肺>血清,萹蓄苷为:肾>胃>心>小肠。槲皮苷在组织中的AUC0-t依次为胃>肾>肝>小肠>脾>脑>心>肺>大肠>血清,萹蓄苷在组织中的AUC0-t依次为:胃>小肠>肾>心,芦丁只在胃里有少量分布。结论:药效学实验的结果表明桑寄生总黄酮具有明显的祛风湿作用,萹蓄苷和槲皮苷经过血液循环,于大鼠组织中有不同程度的分布。可以认为萹蓄苷与槲皮苷是桑寄生总黄酮祛风湿的功效物质,其中,槲皮苷是桑寄生黄酮归经和祛风湿功效的重要物质基础。证实了桑寄生总黄酮是桑寄生祛风湿作用的有效部位。萹蓄苷和槲皮苷的组织分布与桑寄生归肝、肾经的传统认识相吻合。