苜蓿皂苷的提取纯化与生物活性评价

苜蓿皂苷是苜蓿属植物中含有的一类重要的生物活性物质,近年的研究表明,苜蓿皂苷具有显著的降血脂和抗动脉粥样硬化等生理功能,具有很高的药用价值和开发前景。因此,本研究以紫花苜蓿为原料,对其提取纯化及生物活性进行了研究,为苜蓿资源的进一步开发利用提供依据。 本研究的主要试验内容和结果如下:以比色法作为测定苜蓿总皂苷含量的方法,齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)为对照品,筛选出香草醛-高氯酸作为显色体系,经紫外扫描,得其最大吸收波长为560nm,得标准曲线方程为:y=0.1453x-0.0071,相关系数R2=0.9993,其精密度试验的RSD=0.42%,加标回收率为98.3%,其RSD=3.88%,该方法快捷、精确、重现性良好。 试验通过对热醇法和超声波辅助法提取的研究,分别得出了提取的最佳工艺参数:(1)热醇提取。在参考文献中乙醇提取最佳工艺的基础上,通过L9(34)正交实验,得出了热醇法提取的适宜工艺参数为:浸提温度80℃、浸提时间1.5h、乙醇浓度70%、固液比1:20时TAS的得率最高,平均为1.472%,RSD(%)=1.58%。(2)超声波辅助提取。考察了乙醇浓度、超声时间、固液比对TAS得率的影响,乙醇浓度70%、超声时间30min,固液比1:10,TAS得率为2.025%,RSD(%)=4.19%。对两种提取方法的提取率进行比较,得出超声波辅助法比热醇法的提取率高37.57%,超声波技术用于TAS的提取是有效可行的。 试验以TAS的静态吸附量、洗脱率和精制度为考察指标,研究了大孔吸附树脂富集、纯化TAS的吸附性能和洗脱参数,并确定了影响纯化效率不同因素的最佳工艺参数,得出了最佳的上样和洗脱条件:筛选出的最适树脂型号为DM-130型。DM-130型树脂的最佳吸附条件为:溶液pH值为5,上样液浓度为8～12mg/mL,上样液流速为2BV/h;最佳解吸条件为:解吸液流速为2BV/h,解吸液温度为60℃,色谱柱的径高比1:8,先用4BV的水以2BV/h流速洗脱后,再以4BV的50%的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱,可较好的分离TAB。 将提取纯化出的TAS进行生物活性研究时发现:(1)通过还原力试验,得出TAS具有清除游离基的活性,且还原力的大小和TAS的浓度呈现线性关系:(2)TAS具有清除DPPH游离基的作用,不同浓度TAS溶液对DPPH的清除作用不同,也表现出一定的浓度效应。 综上所述,采取超声波辅助醇法提取,利用大孔吸附树脂富集纯化,这些技术和方法可以有效提高TAS这一有效成分的提取率和纯度;通过对TAS体外还原力试验和清除DPPH游离基的试验,初步判断,TAS对DPPH游离基具有一定的清除效果。