白树花菌丝体多糖的分离纯化、结构及其免疫活性研究

白树花[Polyporus albicans (Imaz.) Teng]主要分布于中国吉林省,它归属于担子菌纲多孔菌科多孔菌属。在民间是一种长期被食用和药用的中药真菌,与被广泛证实的具有显著抗肿瘤活性的灰树花属于同科不同种。白树花真菌的化学成分研究和活性研究目前在国内外还属于空白。由于多糖是其主要的活性成分。所以我们开展了对白树花真菌多糖的分离、纯化、结构及其免疫活性的研究。为寻找新的药用来源和开发新的多糖免疫增强剂奠定基础。 从白树花菌丝体中提取出水溶性白树花粗多糖。其糖含量为30.3%。粗多糖经冻融、超滤、醇分级、蛋白酶法和Sevage法联合脱蛋白,凝胶层析后分离得到一个纯化级份PTP。PTP分子量约为3.7万。经DEAE-Sepharose CL-6B、Sepharose CL-6B、HPSEC表明:PTP在分子极性及分子大小上都均一。PC和GC分析表明其单糖组成为Man、Gal,及痕量Ara和Glc。其摩尔比为5.3:1.1:0.3:0.3。 RCP经部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化、GC-MS分析、IR分析、NMR等方法,确定其分子结构为:主链核心部分为(1→3)-β-D-Man、(1→3,6)-β-D-Man、(1→6)-α-D-Gal和一个非还原末端(1→)-β-D-Man残基。其摩尔比为3:1:1:1。支链上还有痕量的Ara和Glc末端残基。担子菌纲中的大多数真菌多糖具有抗肿瘤和免疫调节作用,并且具有β-1,3葡聚糖主链结构,偶尔带有β-1,6分支。我们从担子菌纲多孔菌科白树花菌丝体中分离纯化出一种新颖结构的水溶性多糖PTP,利用化学方法和仪器分析方法鉴定出该多糖为甘露半乳聚糖。其重复结构单位可能为: 对白树花多糖样品进行了免疫实验研究。动物体内、体外淋巴细胞转化试验表明该多糖能显著刺激淋巴细胞转化增殖;巨噬细胞吞噬试验表明该多糖在一定浓度范围内可以明显提高巨噬细胞的吞噬能力;运用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法检测动物体内抗体含量试验表明该多糖能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答。不但能激发Th2免疫应答系统,并且还能激发Th1系统产生IgG2b抗体。Th1免疫应答是产生细胞毒性t淋巴细胞(CTL)的必要条件与抗恶性肿瘤细胞有密切关系。目前使用的免疫佐剂主要刺激Th2类型的免疫应答。这种应答对细胞内病原体和癌细胞无作用。所以PTP代替传统的AL佐剂具有明显的优势,为寻找新的药用来源和开发新的多糖免疫增强剂奠定了基础。