电针对急性脊髓损伤大鼠差异表达基因及钙离子作用的实验研究

本论文分文献综述和实验研究两部分。 第一部分文献综述 文献综述共两篇。第一篇回顾了近年来国内外脊髓损伤(SCI)研究中动物模型的选择和应用。主要从实验动物的选择、脊髓损伤节段的选择、脊髓损伤模型的选择、脊髓损伤动物实验模型的后期管理四个方面进行评述。第二篇着重介绍了针灸对脊髓损伤作用的临床和实验研究概况。 第二部分动物实验 目的:探讨电针对急性脊髓损伤保护作用的机理。 方法:大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、药物组、电针组,用改良Allen’s打击法制成脊髓损伤模型,损伤6h后取材。(1)运动联合计分法(CBS)综合评定大鼠脊髓损伤后的神经功能;(2)测定损伤后血清及损伤局部组织钙离子含量;(3)取电针组、模型组和空白组的损伤局部组织,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、基因芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,获得差异表达基因,通过生物信息学方法对这些差异表达基因在急性脊髓损伤中的作用进行功能分析;(4)采用qRT-PCR法检测损伤局部组织中基因Capn8、Sphk1、Ccl2的表达情况。 结果:损伤6h后,(1)与模型组比较,药物组和电针组的CBS分值有极显著性差异(P<0.01);(2)和假手术组比较,模型组、电针组、药物组的血清及组织的钙离子含量都显著上升,和模型组比较,电针组和药物组的血清及组织钙离子含量显著降低(P<0.05);(3)模型组有266条基因的表达发生了显著的变化,差异表达基因涉及的功能与细胞毒性、神经组织的变性坏死、创伤性炎症和修复再生能力的丧失等有关。电针组有181条差异表达基因。在电针组差异表达而在模型组不出现差异表达的基因共51个,其中有36个上调,15个下调,这些差异表达的基因功能主要涉及创伤愈合、细胞代谢、离子通道稳态、免疫和防御功能、细胞骨架蛋白和细胞外基质、细胞生长发育等;(4)基因Capn8、Sphk1、Ccl2在电针组和模型组中表达上调,与芯片研究结果一致。 结论:电针对脊髓损伤的治疗作用可能是通过降低钙离子含量,纠正钙超载所引发的一系列生化反应,来发挥电针对脊髓组织的保护作用。脊髓损伤后有大量的基因差异表达发生,基因Capn8、Sphk1、Ccl2的上调表达可能与脊髓损伤后钙离子含量升高有关。电针可以调节SCI诱导的基因表达变化,了解电针后基因表达的变化对于深入研究电针抗脊髓损伤机制具有重要意义。