壮丽环苞菇多糖（CIS-A）和硫黄菌多糖（LSM-X）的结构鉴定及生物活性的研究

壮丽环苞菇(Catathelasma imperiale(Fr.)Sing)属伞菌目、白蘑科、松苞菇属。壮丽环苞菇为大型子实体,具有可食用和药用的双重特性。硫黄菌(Lactikporus supharells(Fr.)Murr)属双子叶植物纲,同担子菌亚纲,多孔菌目,多孔菌科,硫黄菌种。作为一种可食用真菌,硫黄菌可调节机体,增进健康。目前对壮丽环苞菇和硫黄菌的研究主要在栽培驯化以及次生代谢产物的抗菌活性上,对壮丽环苞菇和硫黄菌子实体多糖的纯化、结构和免疫调节活性的研究还没有报道。本研究分别以壮丽环苞菇和硫黄菌的子实体为实验材料,采用热水浸提法提取纯化壮丽环苞菇多糖和硫黄菌多糖;HPGPC法,FT-IR法,HPLC法,NMR法,GC-MS法对两种真菌多糖进行结构鉴定;再用CCK-8法、流式细胞仪分析法、中性红法、Griess法、荧光定量法、体外建立细胞模型和体内建立S180肿瘤模型法探讨CIS-A的生物活性;用CCK-8法、流式细胞仪分析法探讨LSM-X的生物活性。研究结果如下:(1)从壮丽环苞菇子实体中提取的多糖,命名为CIS-A。CIS-A多糖为均一组分的纯多糖且重均分子量为50486 Da;CIS-A多糖由葡萄糖和岩藻糖组成,且比例为3:2;即以(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖和(1→3,2)-α-D-吡喃葡萄糖作为骨架,2-O上是由2个(2→3)-β-L-岩藻糖残基的组成的支链。(2)从硫黄菌子实体中提取的多糖,命名为LSM-X。LSM-X多糖为均一组分的纯多糖且重均分子量为14695 Da;LSM-X多糖由葡萄糖,半乳糖和来苏糖组成,且比例为4:2:1;即以(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖和(1→6,4)-β-D-吡喃葡萄糖作为骨架,4-O上连接2个(1→6)-α-D-吡喃半乳糖的侧链,侧链半乳糖的6-O上连接一个(1→6)-α-D-来苏糖。(3)CIS-A的免疫调节活性研究结果:与空白对照组相比,CIS-A在0.625-20μg/m L的浓度范围内,均能促进三种免疫细胞的增殖。当CIS-A多糖浓度为10μg/m L时,B淋巴细胞增殖活性最好,增殖率为73.39%;当CIS-A多糖浓度为20μg/m L时,T淋巴增殖活性最好,增殖率为98.02%;当CIS-A多糖浓度为5μg/mL时,RAW264.7细胞增殖活性最好,增殖率58.63%;CIS-A多糖能通过提高S期中B淋巴细胞的百分比来促进B细胞增殖;与对照组相比,CIS-A多糖的浓度在2.5-20μg/m L的范围内,CIS-A多糖可显著促进巨噬细胞吞噬活性(P<0.01),并有一定的剂量依赖性效应。CIS-A多糖浓度为20μg/mL时,RAW264.7细胞吞噬效果最好;CIS-A多糖浓度为40μg/mL时,RAW264.7细胞释放NO量最多,并且CISA多糖浓度为10μg/m L时可刺激细胞中相关基因(IL-1β、IL-6、IL-8、INOS、TNF-α)表达量的上调,且差异均为极显著(P<0.01)。(4)CIS-A的抗肿瘤活性结果:CIS-A在2.5-40μg/mL的浓度范围内,可不同程度的抑制L929细胞的生长,在5μg/mL时,L929细胞的存活率最低,仅为69%;CIS-A多糖在体内能抑制S180肿瘤的生长,且抑制率为64.4%,并未发现毒副反应。(5)LSM-X的免疫调节活性结果:与空白对照组相比,当LSM-X多糖为10μg/m L时有效促进B细胞的增殖,并且增殖率为48.35%超过阳性对照组(5μg/mL LPS)20.20%的增殖率;当LSM-X多糖为10μg/mL时有效促进T细胞的增殖,增殖率为22.98%,优于5μg/m L LPS促进T细胞增殖的效果;并且都是通过改变细胞周期促进细胞的增殖。研究结果显示CIS-A多糖能促进免疫细胞(B淋巴细胞、T淋巴细胞和RAW264.7细胞)的增殖,且调控B细胞周期可促进B细胞增殖,促进RAW264.7细胞的吞噬活性和释放NO水平,对L929癌细胞株有较强抑制作用,对体内S180肿瘤也有显著的抑制效应;LSM-X多糖亦能促进免疫细胞(B淋巴细胞、T淋巴细胞和RAW264.7细胞)的增殖。本研究对于提取纯化壮丽环苞菇多糖和硫黄菌多糖提供了方法与技术,也提供了这两种真菌多糖具有提高免疫活性和抗肿瘤活性的实验证据,这对于进一步开发壮丽环苞菇和硫黄菌提供了理论依据,尤其是将其应用于提高人类免疫功能和抗肿瘤效应具有重要的实践价值和应用价值,当然更详细的免疫调控机制以及抗肿瘤机制还需进一步探究。