四君子汤对埃坡霉素B化疗的减毒作用及其化学成分研究

化疗药物能有效控制肿瘤细胞的生长,但由于化疗药物是细胞毒性的药物且大部分的化疗药物不具有靶向性,对正常细胞亦具有杀伤作用。即使严格控制药物的使用途径、使用方法、使用剂量,依然无法避免各种不良反应。化疗药物在治疗患者的同时也给患者带来了巨大的痛苦。因此提高化疗患者生存质量是一个亟待解决的问题。 四君子汤由人参、白术、茯苓、甘草按照一定比例煎煮而成。四君子汤可以用于治疗血液循环系统,消化系统疾病和代谢性疾病。且现代药理研究表明,该复方对肿瘤的治疗具有减毒增效作用。 本课题主要研究四君子汤提取物对化疗小鼠的减毒作用,并对其化学成分进行含量测定和结构分析。建立了埃坡霉素B化疗的动物模型,探讨了四君子汤总提物对埃坡霉素B化疗后小鼠存活率的影响,并考察了四君子汤总提物对化疗减毒作用的各项指标的影响。通过正丁醇萃取,将四君子汤总提物分为脂溶性成分和水溶性成分来分析。水溶性成分经过60%乙醇醇沉,分为多糖B部位和多糖C部位。用比色法测定脂溶性成分中黄酮和皂苷含量,并用液相色谱仪测定其中甘草苷、人参皂昔Rg1和甘草酸的含量。比色法测定多糖B部位总糖含量并采用核磁共振手段对其结构进行初步的定性和定量分析。 成功建立埃坡霉素B引起小鼠损伤的化疗动物模型。考察埃坡霉素B和四君子汤提取物的给药剂量,最终选择4.0mg/kg埃坡霉素B和0.2g/kg四君子汤提取物作为最终的给药剂量。考察四君子汤提取物对埃坡霉素B化疗减毒作用的各项指标的影响。结果表明四君子汤提取物可以有效提高小鼠存活率,显著提高小鼠白细胞、淋巴细胞、胸腺指数、脾脏指数和骨髓DNA含量,显著降低小鼠肠道肠杆菌的数量。 比色法测定四君子汤脂溶性成分中总黄酮和总皂苷的含量。结果表明总黄酮含量为11.17%,总皂苷含量为24.16%。更进一步采用UPLC-PDA测定其中代表性物质甘草苷、人参皂苷Rg1和甘草酸的含量,为四君子汤质量控制提供依据。结果表明四君子汤中甘草苷含量为13.12mg/g,人参皂苷Rgl的含量为6.46mg/g,甘草酸的含量为13.00mg/g。 比色法测定四君子汤多糖B部位的糖含量。测定结果表明中性糖含量为68.90%,酸性糖含量为2.99%。单糖组成分析结果表明,四君子汤多糖B部位由木糖、果糖、葡萄糖组成。 采用1H-NAR、13C-NAR和HSQC谱对四君子汤-B糖残基进行初步NMR指纹图谱的定性和定量研究。定性研究结果表明其中可能含有→6)-β-D-Glcp-(1→,→6)-α-D-Glcp-(1→,→1)-α-D-Glcp,-2)-β-D-Fru,→1)-α-L-Araf和→1)-α-L一Araf-(3,5→糖残基。其中→6)-α-D-Glcp一(1→,→6)-β-D-Glcp-(1→和→1)-α-D-Glcp糖残基来源于四种单味药；→2)-β-D-Fru来源于人参、甘草和白术；→1)-α-L-Araf-(3,5→和→1)-αL-Araf糖残基主要来源于白术。基本的定性分析之后,采用NMR定量的方法,以糖残基的各个异头碳氢信号作为参比峰,对主要的糖残基进行了含量测定。结果表明含量最高的糖残基为→1)-α-D-Glcp,来源于人参、甘草和白术。但由于糖残基信号严重重叠,该部分实验还需进一步验证。图18幅,表38个,参考文献53篇。