研究背景:炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的炎症本质及病因不明确,可能与多种因素有关,免疫因素是目前IBD研究热点之一。由于免疫调节的紊乱,促炎性细胞因子交互协同作用,导致炎症的持续发展,在IBD发病机制中起了重要的作用。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-actived protein kinase,MAPK)家族是一组重要的蛋白激酶,研究表明,p38 MAPK信号转导通路在多种促炎性细胞因子的产生与活化中具有关键性作用,其中p38αMAPK是参与免疫与炎症应答的主要亚型。白芍总苷(total glucosides of paeony , TGP)是从中药白芍中提取的有效成分,主要成分是芍药苷(Paeoniflorin,PF)。研究表明,TGP具有一定的免疫调节抑制炎症功能,但对于炎症性肠病是否具有治疗作用目前尚不清楚。 目的:(1)观察白芍总苷对TNBS诱导的实验性大鼠结肠炎的干预效果,分析其对实验性结肠炎是否具有治疗作用。(2)观察实验性结肠炎大鼠的IL-10、TNF-α与p38MAPK、p-p38MAPK等实验室指标变化,分析这些指标与实验性结肠炎发病的关系。(3)分析TGP对实验性结肠炎干预效果与有关实验室指标之间关系,进一步探讨TGP药理作用机制。 方法:60只清洁级雄性SD大鼠随机均分为6组,每组10只。设正常对照组,结肠炎模型组,白芍总苷低、中、高剂量组,奥沙拉嗪组。TNBS/乙醇法构建实验性结肠炎动物模型,建模后第二天根据分组分别予以0.9%生理盐水、TGP(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)、奥沙拉嗪(100mg/kg)每日灌胃,实验期间评估各组疾病活动指数(DAI);干预2周后行结肠大体损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI)评分;以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)水平;以免疫组化方法检测结肠组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达。 结果:与正常对照组相比,结肠炎模型组实验期间DAI均值(0.07±0.02 vs 2.20±0。72,t=8.422,P<0.01)、CMDI(0.30±0.48 vs 5.63±1.41,t=10.227,P<0.01)、TDI(0.20±0.42 vs 7.63±1.69,t=12.163,P<0.01)、血清TNF-α水平(32.09±3.46 pg/ml vs72.35±3.11 pg/ml,t=25.619,P<0.01)以及结肠组织p38MAPK(11502.04±1619.55 vs 13475.02±1590.38,t=2.589,P<0.05)、p-p38MAPK(4029.75±1656.95 vs 16014.51±1753.68,t=14.863,P<0.01)表达显著提高,血清IL-10水平(40.36±6.14 pg/ml vs 27.90±5.04 pg/ml,t=4.622,P<0.01)显著下降;与结肠炎模型组相比,高剂量TGP组实验期间DAI均值显著降低(2.20±0.72 vs 1.05±0.57,t=3.776,P<0.01);中、高剂量TGP组CMDI(5.63±1.41 vs 2.10±1.20, t=5.745,P<0.01;5.63±1.41 vs 1.10±0.99,t=7.996,P<0.01)和TDI(7.63±1.69 vs 4.50±1.35,t=4.369,P<0.01;7.63±1.69 vs 1.30±1.16 , t=9.432 , P<0.01 )显著降低,血清TNF-α水平降低(72.35±3.11pg/ml vs 53.28±4.03 pg/ml,t=11.001,P<0.01;72.35±3.11pg/ml vs 37.02±4.72pg/ml,t=18.207,P<0.01),IL-10水平升高(27.90±5.04pg/ml vs 33.23±5.27pg/ml , t=-2.172 , P<0.05 ; 27.90±5.04pg/ml vs 36.87±4.04pg/ml,t=-4.198,P<0.01),高剂量TGP组结肠组织p38MAPK表达降低(13475.02±1590.38 vs 11516.11±1783.15,t=2.427,P<0.05),中、高剂量TGP组p-p38MAPK显著降低(16014.51±1753.68 vs 13171.44±2329.48,t=2.858,P<0.05;16014.51±1753.68 vs 11887.81±1990.94,t=4.601,P<0.01),差异有显著统计学意义。DAI、CMDI、TDI与血清TNF-α水平(r=0.803,P<0.01;r=0.925,P<0.01;r=0.954,P<0.01)和结肠组织p38MAPK(r=0.706,P<0.01;r=0.667,P<0.01;r=0.663,P<0.01)、p-p38MAPK(r=0.864,P<0.01;r=0.731,P<0.01;r=0.767,P<0.01)表达正相关,与血清IL-10负相关(r=-0.729,P<0.01;r=-0.691,P<0.01;r=-0.714,P<0.01),结肠组织p38MAPK、p-p38MAPK表达与血清TNF-α水平正相关(r=0.558,P<0.01;r=0.766,P<0.01),与血清IL-10负相关(r=-0.523,P<0.01;r=-0.651,P<0.01)。高剂量TGP的疗效与奥沙拉嗪无明显差异。 结论:在TNBS诱导的大鼠结肠炎结肠组织存在p38MAPK的表达与激活增加,并可能通过促进TNF-α等促炎因子的合成,抑制IL-10等抑炎因子合成,使促炎因子与抑炎因子失衡,加重局部免疫调节的紊乱,炎症持续迁延,参与实验性结肠炎的发病。TGP对TNBS诱导的大鼠结肠炎具有良好的保护作用,这一作用可能是通过抑制p38MAPK激活,抑制TNF-α的分泌,促进IL-10的分泌,改善结肠炎的免疫调节紊乱,从而减轻症状和结肠炎性损伤。
