梅花鹿茸胶原的分离提取及活性研究

目的：从梅花鹿茸中分离提取出胶原，并对其性质和活性进行研究，为今后梅花鹿茸的开发研究奠定基础。 方法：采用醇提法制备鹿茸胶原，BCATM试剂盒测定蛋白浓度、RE-HPLC法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测其纯度及其分子量范围，酸水解法测定其氨基酸组成，原子力扫描电镜观测胶原的成膜性：用分离得到的鹿茸Ⅰ型胶原包被培养板，MTT法检测细胞生长情况；采用切除大鼠卵巢的方法复制骨质疏松模型，检测指标为骨密度，骨中钙含量，血清骨钙素、血清碱性磷酸酶、一氧化氮和一氧化氮合成酶；用BI-2000图像分析系统观测骨组织及骨形态。实验数据使用Excel软件中的t检验进行统计学处理，所有数值均以（?）±s表示。 结果：鹿茸醇提物中主要含有Ⅰ型胶原。含量约为70％，相对鲜鹿茸，胶原提取率大约为10％。SDS-PAGE电泳结果显示，鹿茸胶原的分子量分布集中在两部分，一部分在100 kDa-200 kDa之间，为两条分子量相近的蛋白带；另一部分在200 kDa以上。鹿茸胶原具有良好的成膜性。活性实验表明，鹿茸胶原对大鼠成骨细胞具有明显的促贴壁和增殖作用，对去势雌性大鼠骨质疏松症具一定的治疗作用。 结论：本研究提取的产物为鹿茸Ⅰ型胶原；工艺收率高，纯度高；提取的鹿茸胶原具有促进大鼠成骨细胞贴壁和增殖作用，并能够明显提高去卵巢大鼠的骨质量。